生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2003年
3期
11-13
,共3页
郭芝刚%欧阳克清%杨红%高虹%李新平%陈云高%蔡绍皙
郭芝剛%歐暘剋清%楊紅%高虹%李新平%陳雲高%蔡紹皙
곽지강%구양극청%양홍%고홍%리신평%진운고%채소석
野生型白细胞介素-2%突变型白细胞介素-2%毕赤酵母%诱导表达%直接诱导法%转换培养基诱导法
野生型白細胞介素-2%突變型白細胞介素-2%畢赤酵母%誘導錶達%直接誘導法%轉換培養基誘導法
야생형백세포개소-2%돌변형백세포개소-2%필적효모%유도표체%직접유도법%전환배양기유도법
为了简化突变型白细胞介素-2(mutant variant human interleukin-2,MvIL-2)在毕赤酵母中的表达工艺,作者参照传统方法,设计了一种新的表达方法-直接诱导法.在该实验中,在摇瓶条件下,对OD600、诱导时间这两个重要的参数进行了重点研究,并对表达蛋白的抗原性和生物学活性进行鉴定.结果表明:在pH6.0、温度30℃、转速280r/min的条件下进行培养,菌体密度(OD600)达到40时直接在发酵液中加入1%的甲醇进行诱导表达,间隔24h补充同上浓度的甲醇,96h收集发酵液.以相同体积的培养基最后获得的总目的蛋白来比较,直接诱导法的产量是传统诱导法产量的5倍.Western blot的抗原性检测和MTT生物学活性实验证明表达的蛋白是特异性蛋白.MTT法测得突变型IL-2具有4倍于同样在毕赤酵母中表达的天然IL-2的生物活性.
為瞭簡化突變型白細胞介素-2(mutant variant human interleukin-2,MvIL-2)在畢赤酵母中的錶達工藝,作者參照傳統方法,設計瞭一種新的錶達方法-直接誘導法.在該實驗中,在搖瓶條件下,對OD600、誘導時間這兩箇重要的參數進行瞭重點研究,併對錶達蛋白的抗原性和生物學活性進行鑒定.結果錶明:在pH6.0、溫度30℃、轉速280r/min的條件下進行培養,菌體密度(OD600)達到40時直接在髮酵液中加入1%的甲醇進行誘導錶達,間隔24h補充同上濃度的甲醇,96h收集髮酵液.以相同體積的培養基最後穫得的總目的蛋白來比較,直接誘導法的產量是傳統誘導法產量的5倍.Western blot的抗原性檢測和MTT生物學活性實驗證明錶達的蛋白是特異性蛋白.MTT法測得突變型IL-2具有4倍于同樣在畢赤酵母中錶達的天然IL-2的生物活性.
위료간화돌변형백세포개소-2(mutant variant human interleukin-2,MvIL-2)재필적효모중적표체공예,작자삼조전통방법,설계료일충신적표체방법-직접유도법.재해실험중,재요병조건하,대OD600、유도시간저량개중요적삼수진행료중점연구,병대표체단백적항원성화생물학활성진행감정.결과표명:재pH6.0、온도30℃、전속280r/min적조건하진행배양,균체밀도(OD600)체도40시직접재발효액중가입1%적갑순진행유도표체,간격24h보충동상농도적갑순,96h수집발효액.이상동체적적배양기최후획득적총목적단백래비교,직접유도법적산량시전통유도법산량적5배.Western blot적항원성검측화MTT생물학활성실험증명표체적단백시특이성단백.MTT법측득돌변형IL-2구유4배우동양재필적효모중표체적천연IL-2적생물활성.
