生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2004年
2期
6-8
,共3页
冉延超%王一飞%熊盛%张美英%黄文韬%罗林波%刘秋英
冉延超%王一飛%熊盛%張美英%黃文韜%囉林波%劉鞦英
염연초%왕일비%웅성%장미영%황문도%라림파%류추영
核苷二磷酸激酶%六组氨酸%基因表达%蛋白纯化%镍离子螯合层析柱
覈苷二燐痠激酶%六組氨痠%基因錶達%蛋白純化%鎳離子螯閤層析柱
핵감이린산격매%륙조안산%기인표체%단백순화%얼리자오합층석주
目的:为简化纯化过程,获得有临床研究价值的rhtNDPK-A蛋白,构建新型rhNDPK-A基因的表达质粒,利用6×His 标签以Ni+-NTA亲和层析柱纯化蛋白.方法:将抑癌基因nm23-H1从质粒PBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE40中.IPTG诱导表达目的蛋白.通过镍离子螯合层析柱一步纯化法纯化目的蛋白.结果:pQE-40中亚克隆的nm23-H1序列完全正确;目的蛋白在大肠杆菌M15中的表达量可达49.6%;Ni+-NTA亲和层析柱一步纯化后蛋白纯度为93%.结论:构建了带有6×His纯化标签的新型rhNDPK-A基因表达质粒pQE-nm23H1,所构建质粒能高效表达目的蛋白,利用Ni+-NTA亲和层析柱简便高效地纯化了表达产物.
目的:為簡化純化過程,穫得有臨床研究價值的rhtNDPK-A蛋白,構建新型rhNDPK-A基因的錶達質粒,利用6×His 標籤以Ni+-NTA親和層析柱純化蛋白.方法:將抑癌基因nm23-H1從質粒PBVNMH1中亞剋隆于帶有純化標籤的錶達載體pQE40中.IPTG誘導錶達目的蛋白.通過鎳離子螯閤層析柱一步純化法純化目的蛋白.結果:pQE-40中亞剋隆的nm23-H1序列完全正確;目的蛋白在大腸桿菌M15中的錶達量可達49.6%;Ni+-NTA親和層析柱一步純化後蛋白純度為93%.結論:構建瞭帶有6×His純化標籤的新型rhNDPK-A基因錶達質粒pQE-nm23H1,所構建質粒能高效錶達目的蛋白,利用Ni+-NTA親和層析柱簡便高效地純化瞭錶達產物.
목적:위간화순화과정,획득유림상연구개치적rhtNDPK-A단백,구건신형rhNDPK-A기인적표체질립,이용6×His 표첨이Ni+-NTA친화층석주순화단백.방법:장억암기인nm23-H1종질립PBVNMH1중아극륭우대유순화표첨적표체재체pQE40중.IPTG유도표체목적단백.통과얼리자오합층석주일보순화법순화목적단백.결과:pQE-40중아극륭적nm23-H1서렬완전정학;목적단백재대장간균M15중적표체량가체49.6%;Ni+-NTA친화층석주일보순화후단백순도위93%.결론:구건료대유6×His순화표첨적신형rhNDPK-A기인표체질립pQE-nm23H1,소구건질립능고효표체목적단백,이용Ni+-NTA친화층석주간편고효지순화료표체산물.
