绿色荧光蛋白表达载体的改造和表达
록색형광단백표체재체적개조화표체
Construction and Epression of Expression Vector pEGFP - N1 - MSC
  • 万方数据
    黑龙江畜牧兽医 흑룡강축목수의
    HEILONGJIANG JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE
    2007年 1期 13-15 ,共3页

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    绿色荧光蛋白%表达载体%猪%改造 綠色熒光蛋白%錶達載體%豬%改造
    록색형광단백%표체재체%저%개조
    为获得增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEFP-N1-MSC,并观察其在猪成纤维细胞中的表达情况,用Nhe Ⅰ和Age Ⅰ消除pEGFP-N1质粒上的多克隆位点(MSC),然后补平连接,获得增强型绿色荧光蛋白编码基因的真核表达载体pEGFP-N1-MSC质粒,将pEGFP-N1-MSC质粒转化DH5α感受态细胞,于Kanr+LB平板上筛选阳性克隆.重组子经Nhe Ⅰ和Age Ⅰ双酶切鉴定,将该载体转染猪成纤维细胞,24 h后观察EGFP表达情况,48 h后添加G418进行筛选.结果表明:改造的pEGFP-N1-MSC真核表达载体,成功转染猪成纤维细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光,获得可产生绿色荧光的pEGFP-N1-MSC载体,为构建猪双正选择同源重组载体奠定了基础.
    위획득증강형록색형광단백(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)적진핵표체재체pEFP-N1-MSC,병관찰기재저성섬유세포중적표체정황,용Nhe Ⅰ화Age Ⅰ소제pEGFP-N1질립상적다극륭위점(MSC),연후보평련접,획득증강형록색형광단백편마기인적진핵표체재체pEGFP-N1-MSC질립,장pEGFP-N1-MSC질립전화DH5α감수태세포,우Kanr+LB평판상사선양성극륭.중조자경Nhe Ⅰ화Age Ⅰ쌍매절감정,장해재체전염저성섬유세포,24 h후관찰EGFP표체정황,48 h후첨가G418진행사선.결과표명:개조적pEGFP-N1-MSC진핵표체재체,성공전염저성섬유세포,재도치형광현미경하정현록색광,획득가산생록색형광적pEGFP-N1-MSC재체,위구건저쌍정선택동원중조재체전정료기출.
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