军医进修学院学报
軍醫進脩學院學報
군의진수학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF PLA POSTGRADUATE MEDICAL SCHOOL
2010年
4期
360-362
,共3页
刘辉%杨波%刘天懿%焦顺昌%李瑾昱
劉輝%楊波%劉天懿%焦順昌%李瑾昱
류휘%양파%류천의%초순창%리근욱
嵌合受体%基因表达%转染
嵌閤受體%基因錶達%轉染
감합수체%기인표체%전염
目的 通过合成嵌合受体anti-erbB2 scFv-CD28-ξ的基因并建立其真核表达载体,为进一步研究增强NK细胞抗瘤活性创造条件.方法 在DNA2.0和Gene20liga软件辅助下对目的基因密码子及RNA二级结构进行优化并在序列的两端分别引入HindⅢ和EcoRI限制酶切位点,根据基因序列分析的结果化学合成长度为50～70bp的单链oligo,利用PCR将合成的oligo拼接成完整的序列,将合成好的序列装入PMD-18T载体并转染至感受态细胞DH5α,测序验证重组克隆中基因序列.完整的序列经Hind m和EcoRI酶切后连接至目的载体PCDNA3.1(+)中,并转染COS-7细胞.结果 合成DNA片段长度为1 803bp,经测序验证与目的基因嵌合受体anti-erbB2 scFv-CD28-ξ大小、序列一致.结论 构建其真核表达载体PCDNA3.1(+)后转染COS-7细胞,实现了anti-erbB2 scFv-CD28-ξ基因在COS-7细胞中的体外转染及瞬时表达.
目的 通過閤成嵌閤受體anti-erbB2 scFv-CD28-ξ的基因併建立其真覈錶達載體,為進一步研究增彊NK細胞抗瘤活性創造條件.方法 在DNA2.0和Gene20liga軟件輔助下對目的基因密碼子及RNA二級結構進行優化併在序列的兩耑分彆引入HindⅢ和EcoRI限製酶切位點,根據基因序列分析的結果化學閤成長度為50～70bp的單鏈oligo,利用PCR將閤成的oligo拼接成完整的序列,將閤成好的序列裝入PMD-18T載體併轉染至感受態細胞DH5α,測序驗證重組剋隆中基因序列.完整的序列經Hind m和EcoRI酶切後連接至目的載體PCDNA3.1(+)中,併轉染COS-7細胞.結果 閤成DNA片段長度為1 803bp,經測序驗證與目的基因嵌閤受體anti-erbB2 scFv-CD28-ξ大小、序列一緻.結論 構建其真覈錶達載體PCDNA3.1(+)後轉染COS-7細胞,實現瞭anti-erbB2 scFv-CD28-ξ基因在COS-7細胞中的體外轉染及瞬時錶達.
목적 통과합성감합수체anti-erbB2 scFv-CD28-ξ적기인병건립기진핵표체재체,위진일보연구증강NK세포항류활성창조조건.방법 재DNA2.0화Gene20liga연건보조하대목적기인밀마자급RNA이급결구진행우화병재서렬적량단분별인입HindⅢ화EcoRI한제매절위점,근거기인서렬분석적결과화학합성장도위50～70bp적단련oligo,이용PCR장합성적oligo병접성완정적서렬,장합성호적서렬장입PMD-18T재체병전염지감수태세포DH5α,측서험증중조극륭중기인서렬.완정적서렬경Hind m화EcoRI매절후련접지목적재체PCDNA3.1(+)중,병전염COS-7세포.결과 합성DNA편단장도위1 803bp,경측서험증여목적기인감합수체anti-erbB2 scFv-CD28-ξ대소、서렬일치.결론 구건기진핵표체재체PCDNA3.1(+)후전염COS-7세포,실현료anti-erbB2 scFv-CD28-ξ기인재COS-7세포중적체외전염급순시표체.
