中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2010年
4期
241-248
,共8页
陈小义%徐忠伟%王娜%徐瑞成
陳小義%徐忠偉%王娜%徐瑞成
진소의%서충위%왕나%서서성
哇巴因%内皮细胞%细胞凋亡%钙%活性氧%胱天蛋白酶3
哇巴因%內皮細胞%細胞凋亡%鈣%活性氧%胱天蛋白酶3
왜파인%내피세포%세포조망%개%활성양%광천단백매3
目的 研究哇巴因(毒毛花苷G)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法 哇巴因0.01,0.05,0.1,0.5,1和10μmol·L-1与ECV304细胞作用24,48和72 h,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342/碘化丙锭双荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和活性氧(ROS)浓度,逆转录PCR和Western印迹法检测胱天蛋白酶3 mRNA和蛋白表达.结果 哇巴因在0.01～10μmol·L-1浓度范围内与ECV304细胞分别作用24,48和72 h,对细胞存活的抑制率明显增加,且呈浓度和时间依赖性,24,48和72 h浓度-效应相关系数分别为0.984,0.994和0.997(P<0.05);哇巴因作用24,48和72 h的IC50值分别为0.624,0.184和0.041 μmol·L-1,时间-效应相关系数为0.974(P<0.05).哇巴因0.1 μmol·L-1与ECV304细胞作用24 h,细胞凋亡百分率由正常对照组的(4.2±0.5)%升高到(26.0±3.2)%,作用48 h,细胞凋亡率由(4.7±0.5)%升高到(36.5±5.3)%,差异有统计学意义(n=3,P<0.01);同时细胞出现染色质凝集.哇巴因0.01,0.1和0.5 μmol·L-1分别与ECV304细胞作用12,24和36 h,[Ca2+];和ROS浓度呈浓度和时间依赖性增加,在哇巴因0.5 μmol·L-1时[Ca2+];和ROS浓度的时间.效应相关系数分别为0.912和0.924,作用36 h时[Ca2+];和ROS浓度的浓度-效应相关系数分别为0.889和0.907(P<0.05).逆转录PCR和western印迹法分析显示,哇巴因0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24 h后,胱天蛋白酶3 mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24 h,胱天蛋白酶3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 哇巴因可诱导人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡,其机制可能与增加[Ca2+]i和ROS浓度及胱天蛋白酶3表达有关.
目的 研究哇巴因(毒毛花苷G)對人臍靜脈血管內皮細胞ECV304凋亡的誘導作用,併探討其可能的作用機製.方法 哇巴因0.01,0.05,0.1,0.5,1和10μmol·L-1與ECV304細胞作用24,48和72 h,MTT法檢測細胞存活率,Hoechst33342/碘化丙錠雙熒光染色法和流式細胞儀檢測細胞凋亡百分率,激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內遊離Ca2+濃度([Ca2+]i)和活性氧(ROS)濃度,逆轉錄PCR和Western印跡法檢測胱天蛋白酶3 mRNA和蛋白錶達.結果 哇巴因在0.01～10μmol·L-1濃度範圍內與ECV304細胞分彆作用24,48和72 h,對細胞存活的抑製率明顯增加,且呈濃度和時間依賴性,24,48和72 h濃度-效應相關繫數分彆為0.984,0.994和0.997(P<0.05);哇巴因作用24,48和72 h的IC50值分彆為0.624,0.184和0.041 μmol·L-1,時間-效應相關繫數為0.974(P<0.05).哇巴因0.1 μmol·L-1與ECV304細胞作用24 h,細胞凋亡百分率由正常對照組的(4.2±0.5)%升高到(26.0±3.2)%,作用48 h,細胞凋亡率由(4.7±0.5)%升高到(36.5±5.3)%,差異有統計學意義(n=3,P<0.01);同時細胞齣現染色質凝集.哇巴因0.01,0.1和0.5 μmol·L-1分彆與ECV304細胞作用12,24和36 h,[Ca2+];和ROS濃度呈濃度和時間依賴性增加,在哇巴因0.5 μmol·L-1時[Ca2+];和ROS濃度的時間.效應相關繫數分彆為0.912和0.924,作用36 h時[Ca2+];和ROS濃度的濃度-效應相關繫數分彆為0.889和0.907(P<0.05).逆轉錄PCR和western印跡法分析顯示,哇巴因0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304細胞24 h後,胱天蛋白酶3 mRNA錶達增加,差異有統計學意義(P<0.05);哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304細胞24 h,胱天蛋白酶3蛋白錶達明顯增加,差異有統計學意義(P<0.05).結論 哇巴因可誘導人臍靜脈血管內皮細胞ECV304凋亡,其機製可能與增加[Ca2+]i和ROS濃度及胱天蛋白酶3錶達有關.
목적 연구왜파인(독모화감G)대인제정맥혈관내피세포ECV304조망적유도작용,병탐토기가능적작용궤제.방법 왜파인0.01,0.05,0.1,0.5,1화10μmol·L-1여ECV304세포작용24,48화72 h,MTT법검측세포존활솔,Hoechst33342/전화병정쌍형광염색법화류식세포의검측세포조망백분솔,격광공취초현미경관찰세포내유리Ca2+농도([Ca2+]i)화활성양(ROS)농도,역전록PCR화Western인적법검측광천단백매3 mRNA화단백표체.결과 왜파인재0.01～10μmol·L-1농도범위내여ECV304세포분별작용24,48화72 h,대세포존활적억제솔명현증가,차정농도화시간의뢰성,24,48화72 h농도-효응상관계수분별위0.984,0.994화0.997(P<0.05);왜파인작용24,48화72 h적IC50치분별위0.624,0.184화0.041 μmol·L-1,시간-효응상관계수위0.974(P<0.05).왜파인0.1 μmol·L-1여ECV304세포작용24 h,세포조망백분솔유정상대조조적(4.2±0.5)%승고도(26.0±3.2)%,작용48 h,세포조망솔유(4.7±0.5)%승고도(36.5±5.3)%,차이유통계학의의(n=3,P<0.01);동시세포출현염색질응집.왜파인0.01,0.1화0.5 μmol·L-1분별여ECV304세포작용12,24화36 h,[Ca2+];화ROS농도정농도화시간의뢰성증가,재왜파인0.5 μmol·L-1시[Ca2+];화ROS농도적시간.효응상관계수분별위0.912화0.924,작용36 h시[Ca2+];화ROS농도적농도-효응상관계수분별위0.889화0.907(P<0.05).역전록PCR화western인적법분석현시,왜파인0.1화0.5μmol·L-1작용ECV304세포24 h후,광천단백매3 mRNA표체증가,차이유통계학의의(P<0.05);왜파인0.01,0.1화0.5μmol·L-1작용ECV304세포24 h,광천단백매3단백표체명현증가,차이유통계학의의(P<0.05).결론 왜파인가유도인제정맥혈관내피세포ECV304조망,기궤제가능여증가[Ca2+]i화ROS농도급광천단백매3표체유관.
