医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2012年
2期
129-134
,共6页
张群%刘红玉%蒋玥%王玢%颜桂军%孙海翔%胡娅莉
張群%劉紅玉%蔣玥%王玢%顏桂軍%孫海翔%鬍婭莉
장군%류홍옥%장모%왕분%안계군%손해상%호아리
miR-181a%催乳素%蜕膜化%人子宫内膜间质细胞
miR-181a%催乳素%蛻膜化%人子宮內膜間質細胞
miR-181a%최유소%세막화%인자궁내막간질세포
目的 目前虽已发现一些在胚胎着床过程中起重要作用的分子,但微小RNA(microRNA,miRNA)在蜕膜化过程中作用的研究报道较少,文中调查孕鼠围着床期子宫组织中miR-181a的表达规律,并探讨miR-181a对人子宫内膜间质细胞(human endometrial stromal cell,hESC)体外诱导蜕膜化过程中蜕膜化标志基因蜕膜化催乳素(decidual prolactin,dPRL)表达的调控作用.方法 收集怀孕0～6.5d孕鼠子宫组织,采用TRIZOL法提取总RNA,通过实时定量PCR检测子宫组织中miR-181a的表达.制备Ad-miR-181a重组腺病毒,并感染hESC,24h后采用0.5mmol/L 8-Br-cAMP 和1μmol/L Medroxyprogesterone(MPA)联合进行体外蜕膜化诱导培养;通过化学发光免疫法和实时定量PCR分别检测细胞培养液上清中dPRL的浓度与间质细胞中催乳素(prolactin,PRL)mRNA的表达;同时采用荧光素酶报告基因检测miR-181a对hESC中dPRL(-332/+65)启动子的调控作用.结果 早孕小鼠子宫组织中 miR-181a 的表达高于非妊娠小鼠子宫,且随着妊娠天数的增加呈逐渐上升的趋势,在小鼠着床"窗口期"即孕 4.5d达到高峰(2.60±0.15倍,P＜0.01,n=5),孕 5.5d子宫miR-181a的表达开始平稳下降;成功获得滴度为5.19×1010ifu/ml的miR-181a腺病毒,该腺病毒介导的miR-181a过表达显著增加hESC蜕膜化标志基因dPRL mRNA表达水平,增高超过8倍(P＜0.01);在8-Br-cAMP和MPA联合诱导hESC体外蜕膜化时,高表达miR-181a可明显增加8-Br-cAMP联合MPA诱导的PRL mRNA表达水平与PRL蛋白分泌(P＜0.01).荧光素酶报告基因进一步证实miR-181a可以激活dPRL(-332/+65)启动子的活性达到2倍(P＜0.05).结论 miR-181a参与8-Br-cAMP和MPA诱导子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达调控.
目的 目前雖已髮現一些在胚胎著床過程中起重要作用的分子,但微小RNA(microRNA,miRNA)在蛻膜化過程中作用的研究報道較少,文中調查孕鼠圍著床期子宮組織中miR-181a的錶達規律,併探討miR-181a對人子宮內膜間質細胞(human endometrial stromal cell,hESC)體外誘導蛻膜化過程中蛻膜化標誌基因蛻膜化催乳素(decidual prolactin,dPRL)錶達的調控作用.方法 收集懷孕0～6.5d孕鼠子宮組織,採用TRIZOL法提取總RNA,通過實時定量PCR檢測子宮組織中miR-181a的錶達.製備Ad-miR-181a重組腺病毒,併感染hESC,24h後採用0.5mmol/L 8-Br-cAMP 和1μmol/L Medroxyprogesterone(MPA)聯閤進行體外蛻膜化誘導培養;通過化學髮光免疫法和實時定量PCR分彆檢測細胞培養液上清中dPRL的濃度與間質細胞中催乳素(prolactin,PRL)mRNA的錶達;同時採用熒光素酶報告基因檢測miR-181a對hESC中dPRL(-332/+65)啟動子的調控作用.結果 早孕小鼠子宮組織中 miR-181a 的錶達高于非妊娠小鼠子宮,且隨著妊娠天數的增加呈逐漸上升的趨勢,在小鼠著床"窗口期"即孕 4.5d達到高峰(2.60±0.15倍,P＜0.01,n=5),孕 5.5d子宮miR-181a的錶達開始平穩下降;成功穫得滴度為5.19×1010ifu/ml的miR-181a腺病毒,該腺病毒介導的miR-181a過錶達顯著增加hESC蛻膜化標誌基因dPRL mRNA錶達水平,增高超過8倍(P＜0.01);在8-Br-cAMP和MPA聯閤誘導hESC體外蛻膜化時,高錶達miR-181a可明顯增加8-Br-cAMP聯閤MPA誘導的PRL mRNA錶達水平與PRL蛋白分泌(P＜0.01).熒光素酶報告基因進一步證實miR-181a可以激活dPRL(-332/+65)啟動子的活性達到2倍(P＜0.05).結論 miR-181a參與8-Br-cAMP和MPA誘導子宮內膜間質細胞蛻膜化過程中PRL的錶達調控.
목적 목전수이발현일사재배태착상과정중기중요작용적분자,단미소RNA(microRNA,miRNA)재세막화과정중작용적연구보도교소,문중조사잉서위착상기자궁조직중miR-181a적표체규률,병탐토miR-181a대인자궁내막간질세포(human endometrial stromal cell,hESC)체외유도세막화과정중세막화표지기인세막화최유소(decidual prolactin,dPRL)표체적조공작용.방법 수집부잉0～6.5d잉서자궁조직,채용TRIZOL법제취총RNA,통과실시정량PCR검측자궁조직중miR-181a적표체.제비Ad-miR-181a중조선병독,병감염hESC,24h후채용0.5mmol/L 8-Br-cAMP 화1μmol/L Medroxyprogesterone(MPA)연합진행체외세막화유도배양;통과화학발광면역법화실시정량PCR분별검측세포배양액상청중dPRL적농도여간질세포중최유소(prolactin,PRL)mRNA적표체;동시채용형광소매보고기인검측miR-181a대hESC중dPRL(-332/+65)계동자적조공작용.결과 조잉소서자궁조직중 miR-181a 적표체고우비임신소서자궁,차수착임신천수적증가정축점상승적추세,재소서착상"창구기"즉잉 4.5d체도고봉(2.60±0.15배,P＜0.01,n=5),잉 5.5d자궁miR-181a적표체개시평은하강;성공획득적도위5.19×1010ifu/ml적miR-181a선병독,해선병독개도적miR-181a과표체현저증가hESC세막화표지기인dPRL mRNA표체수평,증고초과8배(P＜0.01);재8-Br-cAMP화MPA연합유도hESC체외세막화시,고표체miR-181a가명현증가8-Br-cAMP연합MPA유도적PRL mRNA표체수평여PRL단백분비(P＜0.01).형광소매보고기인진일보증실miR-181a가이격활dPRL(-332/+65)계동자적활성체도2배(P＜0.05).결론 miR-181a삼여8-Br-cAMP화MPA유도자궁내막간질세포세막화과정중PRL적표체조공.
