中华临床医师杂志（电子版）
中華臨床醫師雜誌（電子版）
중화림상의사잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2012年
11期
2944-2950
,共7页
范志海%吴鹏%左保齐%张焕相%沈忆新
範誌海%吳鵬%左保齊%張煥相%瀋憶新
범지해%오붕%좌보제%장환상%침억신
丝素蛋白%组织工程%嗅鞘细胞%纳米纤维
絲素蛋白%組織工程%嗅鞘細胞%納米纖維
사소단백%조직공정%후초세포%납미섬유
目的 探讨不同直径丝素蛋白纳米纤维(SFS)对嗅鞘细胞(OECs)生长及迁移的影响,为脊髓损伤(SCI)修复材料的选择提供实验基础和理论依据.方法 运用静电纺丝技术制备SFS,并通过扫描电镜观察.取SD大鼠嗅球新鲜分离的OECs,采用改良差速贴壁法纯化培养.将纯化后的OECs分别接种至以左旋多聚赖氨酸(对照组)和SFS(400 nm,1200 nm)(实验组)包被盖玻片的培养皿中进行复合培养.复合培养不同时间点行倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞形态、生长、分布及与材料黏附情况.NGFR p75及GFAP免疫荧光染色测定细胞表型,MTT法测定支架材料上OECs的增殖情况.结果 倒置相差显微镜示SFS上培养的OECs与对照组相比,细胞沿丝素纤维迁移,细胞突起方向走向较一致,形态特征无明显差异.扫描电镜观察显示SFS平均直径约为(395±3)nm、(1210±7)nm,纤维呈三维立体网状结构,分布均匀,OECs与材料结合紧密,且细胞突起方向与纤维走向较一致,形态与对照组无明显差异.培养4 d时,免疫荧光染色显示实验组NGFR p75/GFAP阳性,OECs在SFS材料上仍保留其特有的表现型.MTT检测显示:培养第4天时,对照组OECs的吸光度值较1200 nm直径的材料OECs的吸光度值有统计学差异(P<0.05),培养第7天时,对照组OECs的吸光度值较实验组吸光度值有统计学差异(P<0.05),而且OECs在400 nm SFS材料上的吸光度值比在1200 nm SFS材料上的吸光度值高,有统计学差异(P<0.05).400 nm SFS相比1200 nm SFS更能促进OECs的增殖.死活细胞染色试剂检测显示:在培养第4、7天时,实验组细胞形态较对照组正常,成活率较高,两组死亡细胞数比较无明显差异.流式细胞术检测结果显示:在培养第4天时,实验组OECs较对照组OECs的凋亡率无统计学差异(P>0.05).结论 不同直径SFS对OECs的生长与迁移均具有支持作用,SFS有望成为一种新型的组织工程支架材料结合OECs移植修复脊髓损伤.
目的 探討不同直徑絲素蛋白納米纖維(SFS)對嗅鞘細胞(OECs)生長及遷移的影響,為脊髓損傷(SCI)脩複材料的選擇提供實驗基礎和理論依據.方法 運用靜電紡絲技術製備SFS,併通過掃描電鏡觀察.取SD大鼠嗅毬新鮮分離的OECs,採用改良差速貼壁法純化培養.將純化後的OECs分彆接種至以左鏇多聚賴氨痠(對照組)和SFS(400 nm,1200 nm)(實驗組)包被蓋玻片的培養皿中進行複閤培養.複閤培養不同時間點行倒置相差顯微鏡和掃描電鏡觀察細胞形態、生長、分佈及與材料黏附情況.NGFR p75及GFAP免疫熒光染色測定細胞錶型,MTT法測定支架材料上OECs的增殖情況.結果 倒置相差顯微鏡示SFS上培養的OECs與對照組相比,細胞沿絲素纖維遷移,細胞突起方嚮走嚮較一緻,形態特徵無明顯差異.掃描電鏡觀察顯示SFS平均直徑約為(395±3)nm、(1210±7)nm,纖維呈三維立體網狀結構,分佈均勻,OECs與材料結閤緊密,且細胞突起方嚮與纖維走嚮較一緻,形態與對照組無明顯差異.培養4 d時,免疫熒光染色顯示實驗組NGFR p75/GFAP暘性,OECs在SFS材料上仍保留其特有的錶現型.MTT檢測顯示:培養第4天時,對照組OECs的吸光度值較1200 nm直徑的材料OECs的吸光度值有統計學差異(P<0.05),培養第7天時,對照組OECs的吸光度值較實驗組吸光度值有統計學差異(P<0.05),而且OECs在400 nm SFS材料上的吸光度值比在1200 nm SFS材料上的吸光度值高,有統計學差異(P<0.05).400 nm SFS相比1200 nm SFS更能促進OECs的增殖.死活細胞染色試劑檢測顯示:在培養第4、7天時,實驗組細胞形態較對照組正常,成活率較高,兩組死亡細胞數比較無明顯差異.流式細胞術檢測結果顯示:在培養第4天時,實驗組OECs較對照組OECs的凋亡率無統計學差異(P>0.05).結論 不同直徑SFS對OECs的生長與遷移均具有支持作用,SFS有望成為一種新型的組織工程支架材料結閤OECs移植脩複脊髓損傷.
목적 탐토불동직경사소단백납미섬유(SFS)대후초세포(OECs)생장급천이적영향,위척수손상(SCI)수복재료적선택제공실험기출화이론의거.방법 운용정전방사기술제비SFS,병통과소묘전경관찰.취SD대서후구신선분리적OECs,채용개량차속첩벽법순화배양.장순화후적OECs분별접충지이좌선다취뢰안산(대조조)화SFS(400 nm,1200 nm)(실험조)포피개파편적배양명중진행복합배양.복합배양불동시간점행도치상차현미경화소묘전경관찰세포형태、생장、분포급여재료점부정황.NGFR p75급GFAP면역형광염색측정세포표형,MTT법측정지가재료상OECs적증식정황.결과 도치상차현미경시SFS상배양적OECs여대조조상비,세포연사소섬유천이,세포돌기방향주향교일치,형태특정무명현차이.소묘전경관찰현시SFS평균직경약위(395±3)nm、(1210±7)nm,섬유정삼유입체망상결구,분포균균,OECs여재료결합긴밀,차세포돌기방향여섬유주향교일치,형태여대조조무명현차이.배양4 d시,면역형광염색현시실험조NGFR p75/GFAP양성,OECs재SFS재료상잉보류기특유적표현형.MTT검측현시:배양제4천시,대조조OECs적흡광도치교1200 nm직경적재료OECs적흡광도치유통계학차이(P<0.05),배양제7천시,대조조OECs적흡광도치교실험조흡광도치유통계학차이(P<0.05),이차OECs재400 nm SFS재료상적흡광도치비재1200 nm SFS재료상적흡광도치고,유통계학차이(P<0.05).400 nm SFS상비1200 nm SFS경능촉진OECs적증식.사활세포염색시제검측현시:재배양제4、7천시,실험조세포형태교대조조정상,성활솔교고,량조사망세포수비교무명현차이.류식세포술검측결과현시:재배양제4천시,실험조OECs교대조조OECs적조망솔무통계학차이(P>0.05).결론 불동직경SFS대OECs적생장여천이균구유지지작용,SFS유망성위일충신형적조직공정지가재료결합OECs이식수복척수손상.
