生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2012年
3期
31-33
,共3页
林海鹏%沈锦城%尹慧祥%张泽华%张爱联
林海鵬%瀋錦城%尹慧祥%張澤華%張愛聯
림해붕%침금성%윤혜상%장택화%장애련
β-葡萄糖苷酶%毕赤酵母%套叠PCR%基因表达%酶活力
β-葡萄糖苷酶%畢赤酵母%套疊PCR%基因錶達%酶活力
β-포도당감매%필적효모%투첩PCR%기인표체%매활력
目的:为提高β-葡萄糖苷酶的产量,用毕赤酵母取代理氏木霉用于生产,以弥补理氏木霉在大规模生产中的缺陷.方法:用套叠PCR法从理氏木霉基因组中扩增β-葡萄糖苷酶基因(bglⅠ).用T4 DNA连接酶和限制性DNA内酶将bgl Ⅰ重组于P.pastoris表达载体pPIC9K的多克隆位点,获得含bglⅠ的重组表达载体pPIC9K - bglⅠ.通过电转法将其pPIC9K- bglⅠ载体转化于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性以及高表达bglⅠ酶的重组子作为工程菌.结果:用BMGY - BMMY培养基体系,在摇瓶中发酵48 h,表达BglⅠ 30 mg/L,在P.pastoris中表达的BglⅠ能水解对硝基苯-β-D-葡萄糖苷具有β-葡萄糖苷酶活性.其酶活力为56 U/L发酵液.结论:通过这种方法,可以成功地用毕赤酵母表达理氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因.
目的:為提高β-葡萄糖苷酶的產量,用畢赤酵母取代理氏木黴用于生產,以瀰補理氏木黴在大規模生產中的缺陷.方法:用套疊PCR法從理氏木黴基因組中擴增β-葡萄糖苷酶基因(bglⅠ).用T4 DNA連接酶和限製性DNA內酶將bgl Ⅰ重組于P.pastoris錶達載體pPIC9K的多剋隆位點,穫得含bglⅠ的重組錶達載體pPIC9K - bglⅠ.通過電轉法將其pPIC9K- bglⅠ載體轉化于P.pastoris基因組,篩選高G418抗性以及高錶達bglⅠ酶的重組子作為工程菌.結果:用BMGY - BMMY培養基體繫,在搖瓶中髮酵48 h,錶達BglⅠ 30 mg/L,在P.pastoris中錶達的BglⅠ能水解對硝基苯-β-D-葡萄糖苷具有β-葡萄糖苷酶活性.其酶活力為56 U/L髮酵液.結論:通過這種方法,可以成功地用畢赤酵母錶達理氏木黴的β-葡萄糖苷酶基因.
목적:위제고β-포도당감매적산량,용필적효모취대리씨목매용우생산,이미보리씨목매재대규모생산중적결함.방법:용투첩PCR법종리씨목매기인조중확증β-포도당감매기인(bglⅠ).용T4 DNA련접매화한제성DNA내매장bgl Ⅰ중조우P.pastoris표체재체pPIC9K적다극륭위점,획득함bglⅠ적중조표체재체pPIC9K - bglⅠ.통과전전법장기pPIC9K- bglⅠ재체전화우P.pastoris기인조,사선고G418항성이급고표체bglⅠ매적중조자작위공정균.결과:용BMGY - BMMY배양기체계,재요병중발효48 h,표체BglⅠ 30 mg/L,재P.pastoris중표체적BglⅠ능수해대초기분-β-D-포도당감구유β-포도당감매활성.기매활력위56 U/L발효액.결론:통과저충방법,가이성공지용필적효모표체리씨목매적β-포도당감매기인.
