中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
4期
88-90
,共3页
阮二垒%杨丽云%陈芳艳%陈瑞爱%王林川
阮二壘%楊麗雲%陳芳豔%陳瑞愛%王林川
원이루%양려운%진방염%진서애%왕림천
番鸭细小病毒%NS2基因%原核表达%载体构建
番鴨細小病毒%NS2基因%原覈錶達%載體構建
번압세소병독%NS2기인%원핵표체%재체구건
根据已发表的番鸭细小病毒(MDPV)核苷酸序列设计并合成1对引物,对MDPV非结构蛋白NS2基因进行扩增.所获得的PCR产物与预期片段大小相符,约1.4 kb.将该片段直接与pMD18-T载体连接,转化人感受态大肠杆菌DH5α中增殖.在对所提质粒进行快速鉴定、PCR扩增及BamH I酶切线性化初步鉴定的基础上,经限制性内切酶BamH I和Sal l进行双酶切鉴定.将克隆产物pMD18-T-NS2与原核表达载体pET-32a分别用BamH I和Sal I双酶切后,回收目的片段进行定向连接,并转化人感受态大肠杆菌DH5α中.对所获得的重组质粒分别经BamH I单酶切、BamH I和Sal I双酶切,证实含有目的基因,且基因插入方向正确,成功构建了含有MDPV NS2非结构蛋白基因的原核表达载体,为高效原核表达及研制更为有效的基因工程疫苗打下了基础.
根據已髮錶的番鴨細小病毒(MDPV)覈苷痠序列設計併閤成1對引物,對MDPV非結構蛋白NS2基因進行擴增.所穫得的PCR產物與預期片段大小相符,約1.4 kb.將該片段直接與pMD18-T載體連接,轉化人感受態大腸桿菌DH5α中增殖.在對所提質粒進行快速鑒定、PCR擴增及BamH I酶切線性化初步鑒定的基礎上,經限製性內切酶BamH I和Sal l進行雙酶切鑒定.將剋隆產物pMD18-T-NS2與原覈錶達載體pET-32a分彆用BamH I和Sal I雙酶切後,迴收目的片段進行定嚮連接,併轉化人感受態大腸桿菌DH5α中.對所穫得的重組質粒分彆經BamH I單酶切、BamH I和Sal I雙酶切,證實含有目的基因,且基因插入方嚮正確,成功構建瞭含有MDPV NS2非結構蛋白基因的原覈錶達載體,為高效原覈錶達及研製更為有效的基因工程疫苗打下瞭基礎.
근거이발표적번압세소병독(MDPV)핵감산서렬설계병합성1대인물,대MDPV비결구단백NS2기인진행확증.소획득적PCR산물여예기편단대소상부,약1.4 kb.장해편단직접여pMD18-T재체련접,전화인감수태대장간균DH5α중증식.재대소제질립진행쾌속감정、PCR확증급BamH I매절선성화초보감정적기출상,경한제성내절매BamH I화Sal l진행쌍매절감정.장극륭산물pMD18-T-NS2여원핵표체재체pET-32a분별용BamH I화Sal I쌍매절후,회수목적편단진행정향련접,병전화인감수태대장간균DH5α중.대소획득적중조질립분별경BamH I단매절、BamH I화Sal I쌍매절,증실함유목적기인,차기인삽입방향정학,성공구건료함유MDPV NS2비결구단백기인적원핵표체재체,위고효원핵표체급연제경위유효적기인공정역묘타하료기출.
