CAJ | 학술논문

目的:研制抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体,为肝癌干细胞的靶向治疗提供候选抗体药物.方法:从人肝癌组织中分离人肝癌干细胞样细胞(human liver cancer stem-like cells, hLCSLCs),免疫BALB/c裸鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单抗库.应用细胞免疫荧光、无血清成球培养、裸鼠皮下成瘤等方法筛选、鉴定特异识别肝癌干细胞的单克隆抗体.流式细胞仪分选hLCSLCs侧群细胞(hLCSLCs side population cells, hLCSLCs-SP),无血清悬浮培养法和CCK-8法检测杂交瘤单抗对hLCSLC-SP自我更新和增殖能力的影响.结果:细胞融合后获得2 964株杂交瘤克隆,在能与hLCSLCs反应的237株克隆中,有116株单抗能与hLCSLCs的细胞膜结合,其中的33株杂交瘤单抗只与hLCSLC-SP反应(阳性率为2%～5%)、不与非hLCSLC-SP反应.该33株单抗中有6株能与CD133阳性细胞有不同比例的共染,并且与无血清悬浮培养的成球细胞呈阳性反应(阳性率为3%～26%),明显高于hLCSLCs-SP.裸鼠皮下接种1×104个15D2单抗阳性的hLCSLCs,成瘤率为100%.功能性筛选实验发现,6株单抗中的4株能显著抑制hLCSLC-SP的增殖和成球生长,其抑制率分别为24%～42%和13%～50%.结论:采用自建的大容量单克隆抗体库技术,筛选获得了4株特异性识别hLCSLC-SP的功能性单抗,为肝癌干细胞的抗体靶向治疗奠定了基础.
목적:연제항간암간세포적공능성단극륭항체,위간암간세포적파향치료제공후선항체약물.방법:종인간암조직중분리인간암간세포양세포(human liver cancer stem-like cells, hLCSLCs),면역BALB/c라서,채용비세포융합법제비대용량단항고.응용세포면역형광、무혈청성구배양、라서피하성류등방법사선、감정특이식별간암간세포적단극륭항체.류식세포의분선hLCSLCs측군세포(hLCSLCs side population cells, hLCSLCs-SP),무혈청현부배양법화CCK-8법검측잡교류단항대hLCSLC-SP자아경신화증식능력적영향.결과:세포융합후획득2 964주잡교류극륭,재능여hLCSLCs반응적237주극륭중,유116주단항능여hLCSLCs적세포막결합,기중적33주잡교류단항지여hLCSLC-SP반응(양성솔위2%～5%)、불여비hLCSLC-SP반응.해33주단항중유6주능여CD133양성세포유불동비례적공염,병차여무혈청현부배양적성구세포정양성반응(양성솔위3%～26%),명현고우hLCSLCs-SP.라서피하접충1×104개15D2단항양성적hLCSLCs,성류솔위100%.공능성사선실험발현,6주단항중적4주능현저억제hLCSLC-SP적증식화성구생장,기억제솔분별위24%～42%화13%～50%.결론:채용자건적대용량단극륭항체고기술,사선획득료4주특이성식별hLCSLC-SP적공능성단항,위간암간세포적항체파향치료전정료기출.