解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2003年
6期
493-497
,共5页
何晓嫱%陈光明%黄英%杨富强%吴乐园%莫国玉
何曉嬙%陳光明%黃英%楊富彊%吳樂園%莫國玉
하효장%진광명%황영%양부강%오악완%막국옥
疫苗,DNA%肝炎病毒,乙型%治疗型HBV DNA疫苗
疫苗,DNA%肝炎病毒,乙型%治療型HBV DNA疫苗
역묘,DNA%간염병독,을형%치료형HBV DNA역묘
为构建以人白细胞介素-2/γ干扰素(hIL-2/hIFN-γ)融合基因为佐剂的治疗型HBV DNA疫苗,采用DNA重组技术分别构建含有HBV包膜中蛋白(preS2*S)抗原和hIL-2/hIFN-γ融合蛋白的真核表达质粒即pcDNAS2*S和pcDNAIIF,酶谱和测序分析表明克隆的preS2*S和hIL-2/hIFN-γ融合蛋白基因片段的方向、序列与预期相符.用脂质体转染试剂转染COS-7细胞,并用ELISA检测转染细胞培养上清中目的基因表达水平.结果显示,质粒转染后48h达峰值,分别为HBsAg(P/N)=7.63、IL-2=10.35ng/ml、 IFN-γ=7.90 ng/ml.以CTLL-2依赖细胞株/MTT比色法和微量细胞病变抑制法(WISH-VSV)检测 pcDNAIIF转染后48h培养上清中IL-2及IFN-γ活性,结果分别为998U/ml和249U/ml.证明构建的重组质粒pcDNAS2*S和pcDNAIIF结构正确,在体外转染细胞其质粒得到分泌表达并保留生物学活性.
為構建以人白細胞介素-2/γ榦擾素(hIL-2/hIFN-γ)融閤基因為佐劑的治療型HBV DNA疫苗,採用DNA重組技術分彆構建含有HBV包膜中蛋白(preS2*S)抗原和hIL-2/hIFN-γ融閤蛋白的真覈錶達質粒即pcDNAS2*S和pcDNAIIF,酶譜和測序分析錶明剋隆的preS2*S和hIL-2/hIFN-γ融閤蛋白基因片段的方嚮、序列與預期相符.用脂質體轉染試劑轉染COS-7細胞,併用ELISA檢測轉染細胞培養上清中目的基因錶達水平.結果顯示,質粒轉染後48h達峰值,分彆為HBsAg(P/N)=7.63、IL-2=10.35ng/ml、 IFN-γ=7.90 ng/ml.以CTLL-2依賴細胞株/MTT比色法和微量細胞病變抑製法(WISH-VSV)檢測 pcDNAIIF轉染後48h培養上清中IL-2及IFN-γ活性,結果分彆為998U/ml和249U/ml.證明構建的重組質粒pcDNAS2*S和pcDNAIIF結構正確,在體外轉染細胞其質粒得到分泌錶達併保留生物學活性.
위구건이인백세포개소-2/γ간우소(hIL-2/hIFN-γ)융합기인위좌제적치료형HBV DNA역묘,채용DNA중조기술분별구건함유HBV포막중단백(preS2*S)항원화hIL-2/hIFN-γ융합단백적진핵표체질립즉pcDNAS2*S화pcDNAIIF,매보화측서분석표명극륭적preS2*S화hIL-2/hIFN-γ융합단백기인편단적방향、서렬여예기상부.용지질체전염시제전염COS-7세포,병용ELISA검측전염세포배양상청중목적기인표체수평.결과현시,질립전염후48h체봉치,분별위HBsAg(P/N)=7.63、IL-2=10.35ng/ml、 IFN-γ=7.90 ng/ml.이CTLL-2의뢰세포주/MTT비색법화미량세포병변억제법(WISH-VSV)검측 pcDNAIIF전염후48h배양상청중IL-2급IFN-γ활성,결과분별위998U/ml화249U/ml.증명구건적중조질립pcDNAS2*S화pcDNAIIF결구정학,재체외전염세포기질립득도분비표체병보류생물학활성.
