CAJ | 학술논문

以绵羊β-乳球蛋白基因(β-Lactoglobulin,β-LG)为转基因表达框架,将人G-CSF(Human Granulocyte Colony Stimulating Factor,hG-CSF)基因与报告基因-增强型绿色荧光蛋白(Enhnced Green Fluorescenct Protein,EGFP)基因作为双表达单元拼接到β-LG基因的第一外显子处,并在G-CSF基因两侧引入同源重组位点loxP、lox2272,将打靶基因表达构件β-LG-hG-CSF-IRES-EGFP(总长9.3kb)分为两段进行构建,片段I(长5.9kb)与片段Ⅱ(长5.6kb)两段重叠部分为2.2kb.向小鼠受精卵细胞质共注射构件片段I、Ⅱ和NLS(核定位信号)3个基因片段.对仔鼠进行整合与表达的检测.PCR-Southern杂交检测结果表明,片段I的整合率为62.3%(86/138),片段Ⅱ的整合率为54.3%(75/138),片段I、Ⅱ共整合(包括两片段分别整合和染色体外同源重组两种情况)的小鼠为62只,整合率为44.9%(62/138),其中在双阳性转基因小鼠中发生染色体外同源重组的几率为80.6%(50/62).RT-PCR-Southern检测了10只发生染色体外同源重组的转基因雌性小鼠,hG-CSF基因的表达率为90%(9/10),EGFP基因的表达率为100%(10/10),通过对其乳汁紫外吸收光谱的检测,EGFP基因的表达率为50%(5/10).上述结果表明,染色体外同源重组结合细胞质注射技术研制转基因动物是简便实用的转基因途径.
이면양β-유구단백기인(β-Lactoglobulin,β-LG)위전기인표체광가,장인G-CSF(Human Granulocyte Colony Stimulating Factor,hG-CSF)기인여보고기인-증강형록색형광단백(Enhnced Green Fluorescenct Protein,EGFP)기인작위쌍표체단원병접도β-LG기인적제일외현자처,병재G-CSF기인량측인입동원중조위점loxP、lox2272,장타파기인표체구건β-LG-hG-CSF-IRES-EGFP(총장9.3kb)분위량단진행구건,편단I(장5.9kb)여편단Ⅱ(장5.6kb)량단중첩부분위2.2kb.향소서수정란세포질공주사구건편단I、Ⅱ화NLS(핵정위신호)3개기인편단.대자서진행정합여표체적검측.PCR-Southern잡교검측결과표명,편단I적정합솔위62.3%(86/138),편단Ⅱ적정합솔위54.3%(75/138),편단I、Ⅱ공정합(포괄량편단분별정합화염색체외동원중조량충정황)적소서위62지,정합솔위44.9%(62/138),기중재쌍양성전기인소서중발생염색체외동원중조적궤솔위80.6%(50/62).RT-PCR-Southern검측료10지발생염색체외동원중조적전기인자성소서,hG-CSF기인적표체솔위90%(9/10),EGFP기인적표체솔위100%(10/10),통과대기유즙자외흡수광보적검측,EGFP기인적표체솔위50%(5/10).상술결과표명,염색체외동원중조결합세포질주사기술연제전기인동물시간편실용적전기인도경.