SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立
SYBR Green Ⅰ실시형광정량RT-PCR측정후면역결함병독RNA고패수방법적건립
Quantification of Simian Immunodeficiency Virus (SIV) Viral Load Using Real-Time Quantitative RT-PCR with SYBR Green Ⅰ
  • 万方数据
    中国实验动物学报 중국실험동물학보
    ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
    2006年 4期 271-275 ,共5页

    丛喆%李兆忠%魏强%许琰%蒋虹%佟巍%卢圣栋%涂新明

    총철%리조충%위강%허염%장홍%동외%로골동%도신명

    SIV%病毒载量%实时荧光定量RT-PCR%SYBR Green Ⅰ SIV%病毒載量%實時熒光定量RT-PCR%SYBR Green Ⅰ
    SIV%병독재량%실시형광정량RT-PCR%SYBR Green Ⅰ
    目的 建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数.方法 巢式RT-PCR扩增SIV病毒RNA gag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEM T载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒.该质粒经限制性内切酶Not I酶切后,进行体外转录,转录出的RNA产物(RS)纯化后10倍系列稀释,作出标准曲线,作为SIV病毒RNA荧光定量检测的外标准品.结果 应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100 copies/μL.结论 制备的RS外标准品纯度高,SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数.
    목적 건립SYBR Green Ⅰ형광염료실시정량RT-PCR방법,측정후면역결함병독(SIV)RNA고패수.방법 소식RT-PCR확증SIV병독RNA gag기인상1360-1837지간적장도위477 bp적편단,장해편단극륭도pGEM T재체상,구건pGEM-SIVgag477질립.해질립경한제성내절매Not I매절후,진행체외전록,전록출적RNA산물(RS)순화후10배계렬희석,작출표준곡선,작위SIV병독RNA형광정량검측적외표준품.결과 응용Qiagen공사QuantiTect SYBR GREEN RT-PCR Kit,해표준품가정학정량도100 copies/μL.결론 제비적RS외표준품순도고,SYBR Green Ⅰ형광염료실시정량RT-PCR법특이성、민감성고,은정성호,가용우정량측정후면역결함병독(SIV)RNA고패수.
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