细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
9期
856-858
,共3页
付欣%邹东霆%周问渠%邢福祺%李冰
付訢%鄒東霆%週問渠%邢福祺%李冰
부흔%추동정%주문거%형복기%리빙
F10基因%原核表达%抗体
F10基因%原覈錶達%抗體
F10기인%원핵표체%항체
目的:表达F10蛋白,并制备兔抗F10多克隆抗体.方法:利用PCR方法扩增F10基因片段,经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后连接入pET-GST原核表达载体,构建的pET-GST/F10融合重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达蛋白,并以亲和层析的方法进行纯化.表达产物用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定.以纯化的F10蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗F10的多克隆抗体,并以ELISA法检测抗体效价.结果:经酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的F10读码框.SDS-PAGE电泳分析显示pET-GST/F10诱导后表达一相对分子质量(Mr)约为61 000的融合蛋白,与预期结果相符.目的蛋白纯化后的纯度达90%以上,Western blot证实该蛋白是GST/F10的融合蛋白.将纯化的GST/F10融合蛋白免疫家兔,得到的兔抗F10抗体效价达1:20 000.结论:成功构建了人F10基因原核表达载体,并获得了高纯度的F10重组蛋白及兔抗F10抗体,为下一步研究F10基因功能奠定了实验基础.
目的:錶達F10蛋白,併製備兔抗F10多剋隆抗體.方法:利用PCR方法擴增F10基因片段,經BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切後連接入pET-GST原覈錶達載體,構建的pET-GST/F10融閤重組錶達質粒轉化大腸桿菌BL21,經IPTG誘導錶達蛋白,併以親和層析的方法進行純化.錶達產物用SDS-PAGE電泳和Western blot進行分析鑒定.以純化的F10蛋白免疫新西蘭大白兔,製備兔抗F10的多剋隆抗體,併以ELISA法檢測抗體效價.結果:經酶切和覈痠序列分析證實重組質粒包含有正確編碼的F10讀碼框.SDS-PAGE電泳分析顯示pET-GST/F10誘導後錶達一相對分子質量(Mr)約為61 000的融閤蛋白,與預期結果相符.目的蛋白純化後的純度達90%以上,Western blot證實該蛋白是GST/F10的融閤蛋白.將純化的GST/F10融閤蛋白免疫傢兔,得到的兔抗F10抗體效價達1:20 000.結論:成功構建瞭人F10基因原覈錶達載體,併穫得瞭高純度的F10重組蛋白及兔抗F10抗體,為下一步研究F10基因功能奠定瞭實驗基礎.
목적:표체F10단백,병제비토항F10다극륭항체.방법:이용PCR방법확증F10기인편단,경BamH Ⅰ화EcoR Ⅰ매절후련접입pET-GST원핵표체재체,구건적pET-GST/F10융합중조표체질립전화대장간균BL21,경IPTG유도표체단백,병이친화층석적방법진행순화.표체산물용SDS-PAGE전영화Western blot진행분석감정.이순화적F10단백면역신서란대백토,제비토항F10적다극륭항체,병이ELISA법검측항체효개.결과:경매절화핵산서렬분석증실중조질립포함유정학편마적F10독마광.SDS-PAGE전영분석현시pET-GST/F10유도후표체일상대분자질량(Mr)약위61 000적융합단백,여예기결과상부.목적단백순화후적순도체90%이상,Western blot증실해단백시GST/F10적융합단백.장순화적GST/F10융합단백면역가토,득도적토항F10항체효개체1:20 000.결론:성공구건료인F10기인원핵표체재체,병획득료고순도적F10중조단백급토항F10항체,위하일보연구F10기인공능전정료실험기출.
