中国输血杂志
中國輸血雜誌
중국수혈잡지
CHINESE JOURNAL OF BLOOD TRANSFUSION
2007年
5期
368-371
,共4页
马敏%刘晓颖%徐忠%王迅%黄宇闻%莫琴%林俊杰%邱颖捷%钱开诚
馬敏%劉曉穎%徐忠%王迅%黃宇聞%莫琴%林俊傑%邱穎捷%錢開誠
마민%류효영%서충%왕신%황우문%막금%림준걸%구영첩%전개성
血小板制品%改良Chelex-100法%实时荧光定量PCR%细菌污染
血小闆製品%改良Chelex-100法%實時熒光定量PCR%細菌汙染
혈소판제품%개량Chelex-100법%실시형광정량PCR%세균오염
目的 应用实时荧光定量PCR方法检测血小板制品中细菌的探讨.方法 选取金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏杆菌,用改良的Chelex-100法抽提细菌基因组DNA,进行荧光定量PCR检测.并应用过滤法去除反应体系中潜在的细菌及其基因组DNA污染.结果 针对16s rRNA基因保守序列进行扩增的荧光定量PCR方法具有较高的特异性和灵敏度,与人类淋巴细胞及病毒等的基因组无交叉反应.在金黄色葡萄球菌检测中,应用过滤法后最低含菌量组与阴性对照组Ct值有极显著差异(P<0.001).该方法对金黄色葡萄球菌的最低检出量为0.3CFUs/PCR,与阴性对照Ct值有显著差异(P<0.01),在大肠埃希氏杆菌中该法可检测出0.1CFUs/PCR,与阴性对照Ct值有显著性差异(P<0.01).结论 改良Chelex-100法抽提细菌基因组及后续的荧光定量PCR分析用于检测血小板制品中的细菌污染,检测实验缩短到3-4h,操作简单,灵敏性高,特异性好,为在临床标本大规模检测中的应用提供理论基础和实验数据.
目的 應用實時熒光定量PCR方法檢測血小闆製品中細菌的探討.方法 選取金黃色葡萄毬菌及大腸埃希氏桿菌,用改良的Chelex-100法抽提細菌基因組DNA,進行熒光定量PCR檢測.併應用過濾法去除反應體繫中潛在的細菌及其基因組DNA汙染.結果 針對16s rRNA基因保守序列進行擴增的熒光定量PCR方法具有較高的特異性和靈敏度,與人類淋巴細胞及病毒等的基因組無交扠反應.在金黃色葡萄毬菌檢測中,應用過濾法後最低含菌量組與陰性對照組Ct值有極顯著差異(P<0.001).該方法對金黃色葡萄毬菌的最低檢齣量為0.3CFUs/PCR,與陰性對照Ct值有顯著差異(P<0.01),在大腸埃希氏桿菌中該法可檢測齣0.1CFUs/PCR,與陰性對照Ct值有顯著性差異(P<0.01).結論 改良Chelex-100法抽提細菌基因組及後續的熒光定量PCR分析用于檢測血小闆製品中的細菌汙染,檢測實驗縮短到3-4h,操作簡單,靈敏性高,特異性好,為在臨床標本大規模檢測中的應用提供理論基礎和實驗數據.
목적 응용실시형광정량PCR방법검측혈소판제품중세균적탐토.방법 선취금황색포도구균급대장애희씨간균,용개량적Chelex-100법추제세균기인조DNA,진행형광정량PCR검측.병응용과려법거제반응체계중잠재적세균급기기인조DNA오염.결과 침대16s rRNA기인보수서렬진행확증적형광정량PCR방법구유교고적특이성화령민도,여인류림파세포급병독등적기인조무교차반응.재금황색포도구균검측중,응용과려법후최저함균량조여음성대조조Ct치유겁현저차이(P<0.001).해방법대금황색포도구균적최저검출량위0.3CFUs/PCR,여음성대조Ct치유현저차이(P<0.01),재대장애희씨간균중해법가검측출0.1CFUs/PCR,여음성대조Ct치유현저성차이(P<0.01).결론 개량Chelex-100법추제세균기인조급후속적형광정량PCR분석용우검측혈소판제품중적세균오염,검측실험축단도3-4h,조작간단,령민성고,특이성호,위재림상표본대규모검측중적응용제공이론기출화실험수거.
