CAJ | 학술논문

分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs), 采用丹参对4～5代MSCs进行反复多次诱导分化及再分化, 将其诱导分化为神经样细胞, 倒置显微镜下连续观察形态学变化, 通过免疫荧光细胞化学检测神经样细胞巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白 (neurofiliament, NF)、突触(小)泡蛋白(synaptophysin) 的表达, 采用细胞膜电位特异的荧光探针DiBAC4(3)标记细胞, 激光扫描共聚焦显微镜动态监测细胞受高钾刺激前后的荧光强度变化, 观察细胞电生理反应.结果显示: MSCs第1次经过丹参诱导2 h后, MSCs伸出突起, 向神经性细胞形态转变, 此时巢蛋白表达率为 (95.1±2.1)% (x±s, n=3), 基本不表达NF; 随着诱导分化及去分化过程的次数增加, 细胞分化为神经样细胞的时间缩短, 突起拉长并交互缠绕呈复杂网状, MSCs第4次经过丹参诱导1 h后, NF表达率(95.3±1.6)% (x±s, n=3), 并表达突触(小)泡蛋白, 5 h后突触(小)泡蛋白表达更为广泛; 激光共聚焦扫描显微镜显示第4次诱导5 h后的细胞在高钾刺激下发生去极化, 胞内荧光强度瞬时增强, 而MSCs空白对照对高钾刺激无反应.本优化诱导方案可以高效率地诱导MSCs分化为具有电生理特性的神经样细胞.
분리배양대서골수간충질간세포(mesenchymal stem cells, MSCs), 채용단삼대4～5대MSCs진행반복다차유도분화급재분화, 장기유도분화위신경양세포, 도치현미경하련속관찰형태학변화, 통과면역형광세포화학검측신경양세포소단백(nestin)、신경사단백 (neurofiliament, NF)、돌촉(소)포단백(synaptophysin) 적표체, 채용세포막전위특이적형광탐침DiBAC4(3)표기세포, 격광소묘공취초현미경동태감측세포수고갑자격전후적형광강도변화, 관찰세포전생리반응.결과현시: MSCs제1차경과단삼유도2 h후, MSCs신출돌기, 향신경성세포형태전변, 차시소단백표체솔위 (95.1±2.1)% (x±s, n=3), 기본불표체NF; 수착유도분화급거분화과정적차수증가, 세포분화위신경양세포적시간축단, 돌기랍장병교호전요정복잡망상, MSCs제4차경과단삼유도1 h후, NF표체솔(95.3±1.6)% (x±s, n=3), 병표체돌촉(소)포단백, 5 h후돌촉(소)포단백표체경위엄범; 격광공취초소묘현미경현시제4차유도5 h후적세포재고갑자격하발생거겁화, 포내형광강도순시증강, 이MSCs공백대조대고갑자격무반응.본우화유도방안가이고효솔지유도MSCs분화위구유전생리특성적신경양세포.