CAJ | 학술논문

目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)对K562细胞株分化和凋亡的影响及对相关基因的调控,为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的治疗靶点.方法:将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα及空载体对照质粒pEGFP分别经阳离子脂质体2000介导转染K562细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株.Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化,FCM分析细胞表面分化抗原CD11b的表达、细胞周期及细胞凋亡,电子显微镜观察细胞凋亡,RT-PCR和Western印迹法检测细胞中相关基因Per 2、cyclin B1和C-myc的表达.结果:筛选得到稳定表达C/EBPα的细胞株pEGFP-C/EBPα-K562.与空载体转染组及对照组细胞相比,转染组K562细胞分化明显,同时粒系细胞表面分化抗原CD11b表达增加;细胞周期分析发现,转染组细胞中G2期细胞增多,与空载体组和对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),同时出现细胞凋亡峰.细胞凋亡检测结果显示,转染组细胞凋亡明显增加(21.1%),与空载体组(6.0%)和对照组(4.2%)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);电子显微镜观察发现,转染组细胞中出现染色质浓集、断裂和核固缩等现象,并见凋亡小体;RT-PCR和Western印迹法检测发现,C/EBPα明显上调Per 2 mRNA和蛋白表达,抑制cyclinB1、C-myc mRNA和蛋白的表达.结论:C/EBPα能促进K562细胞分化,并诱导细胞凋亡,其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控来实现的.
목적:연구CCAAT/증강자결합단백α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)대K562세포주분화화조망적영향급대상관기인적조공,위만성립세포백혈병적치료제공신적치료파점.방법:장C/EBPα표체질립pEGFP-C/EBPα급공재체대조질립pEGFP분별경양리자지질체2000개도전염K562세포,용G418사선출C/EBPα은정표체세포주.Wright-Giemsa염색관찰세포형태학변화,FCM분석세포표면분화항원CD11b적표체、세포주기급세포조망,전자현미경관찰세포조망,RT-PCR화Western인적법검측세포중상관기인Per 2、cyclin B1화C-myc적표체.결과:사선득도은정표체C/EBPα적세포주pEGFP-C/EBPα-K562.여공재체전염조급대조조세포상비,전염조K562세포분화명현,동시립계세포표면분화항원CD11b표체증가;세포주기분석발현,전염조세포중G2기세포증다,여공재체조화대조조상비,차이유통계학의의(P＜0.05),동시출현세포조망봉.세포조망검측결과현시,전염조세포조망명현증가(21.1%),여공재체조(6.0%)화대조조(4.2%)비교,차이유통계학의의(P＜0.05);전자현미경관찰발현,전염조세포중출현염색질농집、단렬화핵고축등현상,병견조망소체;RT-PCR화Western인적법검측발현,C/EBPα명현상조Per 2 mRNA화단백표체,억제cyclinB1、C-myc mRNA화단백적표체.결론:C/EBPα능촉진K562세포분화,병유도세포조망,기궤제가능시통과대세포주기상관기인적조공래실현적.