CAJ | 학술논문

为了获得大量的、可供试验研究和制作生物反应器的人瘦素蛋白,从人脂肪组织中提取总RNA,用RT-PCR法获得了编码人瘦素(leptin)167个氨基酸残基的cDNA序列,并克隆至载体pMD19-T Simple上进行序列分析.以克隆的人瘦素cDNA为模板,用特异引物扩增瘦素基因,经Eco RI和Bam HJ双酶切,定向插入高效原核细胞表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE检测.结果:用RT-PCR法扩增得到的cDNA片断序列分析显示,克隆的基因序列和GenBank公布的人瘦素基因序列一致;SDS-PAGE分析基因表达产物,在20 ku处有一特异条带,说明重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中可表达人瘦素蛋白.
위료획득대량적、가공시험연구화제작생물반응기적인수소단백,종인지방조직중제취총RNA,용RT-PCR법획득료편마인수소(leptin)167개안기산잔기적cDNA서렬,병극륭지재체pMD19-T Simple상진행서렬분석.이극륭적인수소cDNA위모판,용특이인물확증수소기인,경Eco RI화Bam HJ쌍매절,정향삽입고효원핵세포표체재체pGEX-6P-1중,구건중조질립병전화대장간균BL21(DE3),통과IPTG유도표체,진행SDS-PAGE검측.결과:용RT-PCR법확증득도적cDNA편단서렬분석현시,극륭적기인서렬화GenBank공포적인수소기인서렬일치;SDS-PAGE분석기인표체산물,재20 ku처유일특이조대,설명중조질립재대장간균BL21(DE3)중가표체인수소단백.