基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2009年
8期
863-866
,共4页
潘建刚%周兴%韩瑞发%陈志光%李江婷
潘建剛%週興%韓瑞髮%陳誌光%李江婷
반건강%주흥%한서발%진지광%리강정
膀胱肿瘤%腺相关病毒%自杀基因%内皮抑素
膀胱腫瘤%腺相關病毒%自殺基因%內皮抑素
방광종류%선상관병독%자살기인%내피억소
目的 探讨重组腺相关病毒(rAAV)-胸苷激酶(TK)-核糖体插入位点(IRES)-内皮抑素(ES)(简称rAAV-TIE)非融合载体的构建及每个目的 基因相应生物学效应的初步鉴定.方法 (1)用PER分别扩增IRES、TK、ES序列至pMD-19T simple载体,构建pAAV-TK-IRES-ES;(2)分别采用从V-Helper Free System包装系统、"氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩.(3)用T24细胞及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对rAAV-TIE生物学效应进行初步鉴定.结果(1)成功构建pAAV-TIE非融合载体,并经酶切、PCR及测序证实;(2)rAAV病毒颗粒滴度达2×1010v.p/mL,浓缩后可达到2×1011-12 v.p/mL;(3)rAAV-TIE可以分泌内皮抑素,诱导T24细胞及HUVEC凋亡.结论 成功构建rAAV-TIE腺相关病毒,体外实验表明每个基因片段均能发挥相应的生物学功能.
目的 探討重組腺相關病毒(rAAV)-胸苷激酶(TK)-覈糖體插入位點(IRES)-內皮抑素(ES)(簡稱rAAV-TIE)非融閤載體的構建及每箇目的 基因相應生物學效應的初步鑒定.方法 (1)用PER分彆擴增IRES、TK、ES序列至pMD-19T simple載體,構建pAAV-TK-IRES-ES;(2)分彆採用從V-Helper Free System包裝繫統、"氯倣-PEG/NaCl沉澱-氯倣抽提"及冰乙醇沉澱法進行AAV的包裝、純化和濃縮.(3)用T24細胞及人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)對rAAV-TIE生物學效應進行初步鑒定.結果(1)成功構建pAAV-TIE非融閤載體,併經酶切、PCR及測序證實;(2)rAAV病毒顆粒滴度達2×1010v.p/mL,濃縮後可達到2×1011-12 v.p/mL;(3)rAAV-TIE可以分泌內皮抑素,誘導T24細胞及HUVEC凋亡.結論 成功構建rAAV-TIE腺相關病毒,體外實驗錶明每箇基因片段均能髮揮相應的生物學功能.
목적 탐토중조선상관병독(rAAV)-흉감격매(TK)-핵당체삽입위점(IRES)-내피억소(ES)(간칭rAAV-TIE)비융합재체적구건급매개목적 기인상응생물학효응적초보감정.방법 (1)용PER분별확증IRES、TK、ES서렬지pMD-19T simple재체,구건pAAV-TK-IRES-ES;(2)분별채용종V-Helper Free System포장계통、"록방-PEG/NaCl침정-록방추제"급빙을순침정법진행AAV적포장、순화화농축.(3)용T24세포급인제정맥내피세포(HUVEC)대rAAV-TIE생물학효응진행초보감정.결과(1)성공구건pAAV-TIE비융합재체,병경매절、PCR급측서증실;(2)rAAV병독과립적도체2×1010v.p/mL,농축후가체도2×1011-12 v.p/mL;(3)rAAV-TIE가이분비내피억소,유도T24세포급HUVEC조망.결론 성공구건rAAV-TIE선상관병독,체외실험표명매개기인편단균능발휘상응적생물학공능.
