医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2010年
4期
300-304
,共5页
王波%刘庆军%于景翠%尹玉静%魏旭冉%周虹
王波%劉慶軍%于景翠%尹玉靜%魏旭冉%週虹
왕파%류경군%우경취%윤옥정%위욱염%주홍
血红素加氧酶-1%肿瘤%基因重组
血紅素加氧酶-1%腫瘤%基因重組
혈홍소가양매-1%종류%기인중조
目的 构建人血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)及其突变体的真核表达载体,观察其在胃腺癌细胞中HO-1表达和活性变化,研究HO-1活性变化的胃腺癌细胞对顺铂抗药能力的变化,为进一步研究HO-1对肿瘤细胞影响机制奠定基础.方法 根据GenBank中HO-1 cDNA序列设计引物,调取基因并克隆人pcDNA3.1(+)质粒中,构建表达人野生型HO-1与突变型HO-1(HO-1G143H)的重组质粒.脂质体介导重组质粒转染胃腺癌细胞BGC823,用RT-PCR和Western印迹法分别检测细胞中HO-1 mRNA的表达和蛋白表达水平,体外测定HO-1活性变化,应用顺铂进行体外抗药性实验.结果 酶切鉴定和测序证实,HO-1真核表达载体构建成功;转染质粒后的BGC823,HO-1的mRNA和蛋白的表达水平明显上升;转入野生型质粒的细胞HO-1活性上升,转入突变型质粒的细胞HO-1活性下降;HO-1活性下降BGC823细胞抗顺铂杀伤能力增强.结论 构建了HO-1野生型与突变型真核表达载体;将其转入胃腺癌细胞,引起了HO-1的mRNA和蛋白表达的增加和活性变化;体外实验表明,HO-1活性下降的BGC823细胞抗顺铂能力增强.
目的 構建人血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)及其突變體的真覈錶達載體,觀察其在胃腺癌細胞中HO-1錶達和活性變化,研究HO-1活性變化的胃腺癌細胞對順鉑抗藥能力的變化,為進一步研究HO-1對腫瘤細胞影響機製奠定基礎.方法 根據GenBank中HO-1 cDNA序列設計引物,調取基因併剋隆人pcDNA3.1(+)質粒中,構建錶達人野生型HO-1與突變型HO-1(HO-1G143H)的重組質粒.脂質體介導重組質粒轉染胃腺癌細胞BGC823,用RT-PCR和Western印跡法分彆檢測細胞中HO-1 mRNA的錶達和蛋白錶達水平,體外測定HO-1活性變化,應用順鉑進行體外抗藥性實驗.結果 酶切鑒定和測序證實,HO-1真覈錶達載體構建成功;轉染質粒後的BGC823,HO-1的mRNA和蛋白的錶達水平明顯上升;轉入野生型質粒的細胞HO-1活性上升,轉入突變型質粒的細胞HO-1活性下降;HO-1活性下降BGC823細胞抗順鉑殺傷能力增彊.結論 構建瞭HO-1野生型與突變型真覈錶達載體;將其轉入胃腺癌細胞,引起瞭HO-1的mRNA和蛋白錶達的增加和活性變化;體外實驗錶明,HO-1活性下降的BGC823細胞抗順鉑能力增彊.
목적 구건인혈홍소가양매-1(heme oxygenase-1,HO-1)급기돌변체적진핵표체재체,관찰기재위선암세포중HO-1표체화활성변화,연구HO-1활성변화적위선암세포대순박항약능력적변화,위진일보연구HO-1대종류세포영향궤제전정기출.방법 근거GenBank중HO-1 cDNA서렬설계인물,조취기인병극륭인pcDNA3.1(+)질립중,구건표체인야생형HO-1여돌변형HO-1(HO-1G143H)적중조질립.지질체개도중조질립전염위선암세포BGC823,용RT-PCR화Western인적법분별검측세포중HO-1 mRNA적표체화단백표체수평,체외측정HO-1활성변화,응용순박진행체외항약성실험.결과 매절감정화측서증실,HO-1진핵표체재체구건성공;전염질립후적BGC823,HO-1적mRNA화단백적표체수평명현상승;전입야생형질립적세포HO-1활성상승,전입돌변형질립적세포HO-1활성하강;HO-1활성하강BGC823세포항순박살상능력증강.결론 구건료HO-1야생형여돌변형진핵표체재체;장기전입위선암세포,인기료HO-1적mRNA화단백표체적증가화활성변화;체외실험표명,HO-1활성하강적BGC823세포항순박능력증강.
