中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
5期
85-89
,共5页
刘颖%王冰%于清龙%熊家军%杨利国%陈焕春%郭爱珍
劉穎%王冰%于清龍%熊傢軍%楊利國%陳煥春%郭愛珍
류영%왕빙%우청룡%웅가군%양리국%진환춘%곽애진
梅花鹿%γ-干扰素%细胞系%真核表达
梅花鹿%γ-榦擾素%細胞繫%真覈錶達
매화록%γ-간우소%세포계%진핵표체
提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ-干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%.将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI-neo上.利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI-neo-CerIFN-γ转染人中国仓鼠肾细胞(BHK-21)和牛肾细胞(MDBK)中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系.通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16ku,与预测大小一致.本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础.
提取經植物血凝素誘導培養的梅花鹿外週血淋巴細胞總RNA,應用RT-PCR方法擴增齣梅花鹿γ-榦擾素成熟蛋白基因,經剋隆測序錶明與GenBank上髮錶的榦擾素序列同源性為100%.將其重組到含有CMV增彊子的真覈錶達載體質粒pCI-neo上.利用燐痠鈣介導轉染法將重組載體質粒pCI-neo-CerIFN-γ轉染人中國倉鼠腎細胞(BHK-21)和牛腎細胞(MDBK)中,在G418抗性壓力下進行篩選培養穫得瞭穩定分泌錶達的轉染細胞繫.通過Western blotting檢測確定錶達產物的相對分子質量分彆為23、20、16ku,與預測大小一緻.本研究成果為進一步開髮梅花鹿生物製品類治療製劑奠定瞭基礎.
제취경식물혈응소유도배양적매화록외주혈림파세포총RNA,응용RT-PCR방법확증출매화록γ-간우소성숙단백기인,경극륭측서표명여GenBank상발표적간우소서렬동원성위100%.장기중조도함유CMV증강자적진핵표체재체질립pCI-neo상.이용린산개개도전염법장중조재체질립pCI-neo-CerIFN-γ전염인중국창서신세포(BHK-21)화우신세포(MDBK)중,재G418항성압력하진행사선배양획득료은정분비표체적전염세포계.통과Western blotting검측학정표체산물적상대분자질량분별위23、20、16ku,여예측대소일치.본연구성과위진일보개발매화록생물제품류치료제제전정료기출.
