中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
40期
7493-7496
,共4页
脂肪%间充质干细胞%生物学特性%分离培养%干细胞
脂肪%間充質榦細胞%生物學特性%分離培養%榦細胞
지방%간충질간세포%생물학특성%분리배양%간세포
背景:脂肪来源间充质干细胞取材于吸脂手术所获得的脂肪抽吸物,可反复取材,原料来源充足.目的:建立一种体外分离培养人脂肪来源间充质干细胞的方法,并分析其生物学特性.方法:采用胶原酶消化法分离获取人脂肪来源间充质干细胞并进行体外培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态;观察分析传代第3,7,10 代细胞生长曲线;采用流式细胞仪检测传代第5 代细胞表面标志表达.取传代第4代细胞行体外成骨细胞诱导和成脂诱导,采用碱性磷酸酶染色及油红O染色鉴定.冻存传代细胞,分别于 2,6 个月后复苏,锥虫蓝染色计数复苏后细胞存活率.结果与结论:原代细胞3 d 贴壁,6 d 后开始快速增长并形成集落,11 d左右达80%~90%融合,多呈纤维样;传代后细胞维持纤维样形态.传代细胞潜伏期24~48 h,对数增殖期三四天,对数增殖期后第五六天进入平台期.间充质干细胞表面CD34、CD14、HLA-DR 呈阴性表达,CD44、CD105、CD13呈阳性表达,HLA-ABC呈弱阳性表达.具有向脂肪细胞、成骨细胞分化的能力,冻存复苏后细胞存活率达 90% 以上,且与未冻存传代细胞具有相同的生长特性.
揹景:脂肪來源間充質榦細胞取材于吸脂手術所穫得的脂肪抽吸物,可反複取材,原料來源充足.目的:建立一種體外分離培養人脂肪來源間充質榦細胞的方法,併分析其生物學特性.方法:採用膠原酶消化法分離穫取人脂肪來源間充質榦細胞併進行體外培養,倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態;觀察分析傳代第3,7,10 代細胞生長麯線;採用流式細胞儀檢測傳代第5 代細胞錶麵標誌錶達.取傳代第4代細胞行體外成骨細胞誘導和成脂誘導,採用堿性燐痠酶染色及油紅O染色鑒定.凍存傳代細胞,分彆于 2,6 箇月後複囌,錐蟲藍染色計數複囌後細胞存活率.結果與結論:原代細胞3 d 貼壁,6 d 後開始快速增長併形成集落,11 d左右達80%~90%融閤,多呈纖維樣;傳代後細胞維持纖維樣形態.傳代細胞潛伏期24~48 h,對數增殖期三四天,對數增殖期後第五六天進入平檯期.間充質榦細胞錶麵CD34、CD14、HLA-DR 呈陰性錶達,CD44、CD105、CD13呈暘性錶達,HLA-ABC呈弱暘性錶達.具有嚮脂肪細胞、成骨細胞分化的能力,凍存複囌後細胞存活率達 90% 以上,且與未凍存傳代細胞具有相同的生長特性.
배경:지방래원간충질간세포취재우흡지수술소획득적지방추흡물,가반복취재,원료래원충족.목적:건립일충체외분리배양인지방래원간충질간세포적방법,병분석기생물학특성.방법:채용효원매소화법분리획취인지방래원간충질간세포병진행체외배양,도치상차현미경하관찰세포형태;관찰분석전대제3,7,10 대세포생장곡선;채용류식세포의검측전대제5 대세포표면표지표체.취전대제4대세포행체외성골세포유도화성지유도,채용감성린산매염색급유홍O염색감정.동존전대세포,분별우 2,6 개월후복소,추충람염색계수복소후세포존활솔.결과여결론:원대세포3 d 첩벽,6 d 후개시쾌속증장병형성집락,11 d좌우체80%~90%융합,다정섬유양;전대후세포유지섬유양형태.전대세포잠복기24~48 h,대수증식기삼사천,대수증식기후제오륙천진입평태기.간충질간세포표면CD34、CD14、HLA-DR 정음성표체,CD44、CD105、CD13정양성표체,HLA-ABC정약양성표체.구유향지방세포、성골세포분화적능력,동존복소후세포존활솔체 90% 이상,차여미동존전대세포구유상동적생장특성.
