生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
6期
789-792
,共4页
欧晓敏%李少华%刘农乐%孙卫国%赵强%丁红梅%王芳%邵宁生
歐曉敏%李少華%劉農樂%孫衛國%趙彊%丁紅梅%王芳%邵寧生
구효민%리소화%류농악%손위국%조강%정홍매%왕방%소저생
人β神经生长因子%稀有密码子%mRNA二级结构%大肠杆菌
人β神經生長因子%稀有密碼子%mRNA二級結構%大腸桿菌
인β신경생장인자%희유밀마자%mRNA이급결구%대장간균
目的:研究人β神经生长因子(3-NGF)基因中稀有密码子及其mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达量的影响.方法:根据对人β-ngf中稀有密码子及其mRNA二级结构的研究,同义突变人β-ngf基因,通过PCR得到人β-ngf的5 ′端同义突变基因rh-β-ngfp2和全同义突变基因rh-β-ngfinu,将这2个序列克隆入载体pET3a中,得到重组质粒pET3a-ngfp32和pET3a-ngfmu,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,IPTG诱导表达,收集菌体,SDS -PAGE检测其表达量的改变.结果:构建的pET3a-ngfp32和pET3a-ngfnu表达载体酶切和测序结果正确,SDS-PAGE结果显示,与在重组菌pET3a-NGF总蛋白中的表达量相比,目的蛋白rh-3-NGF在重组菌pET3a-NGFP32和pET3a-NGFmu中的表达量均明显增高,并且在重组菌pET3a-NGFmu中的表达量高于重组菌pET3a-NGFP32.结论:目的蛋白rh-3-NGF在重组菌pET3a-NGFP32和pET3a-NGFmu中表达量的增高,说明人β-ngf基因中稀有密码子和mRNA的二级结构对其在大肠杆菌中的表达有较为明显的影响,结果为构建rh-3-NGF的大肠杆菌工程菌株奠定了基础.
目的:研究人β神經生長因子(3-NGF)基因中稀有密碼子及其mRNA二級結構對其在大腸桿菌中錶達量的影響.方法:根據對人β-ngf中稀有密碼子及其mRNA二級結構的研究,同義突變人β-ngf基因,通過PCR得到人β-ngf的5 ′耑同義突變基因rh-β-ngfp2和全同義突變基因rh-β-ngfinu,將這2箇序列剋隆入載體pET3a中,得到重組質粒pET3a-ngfp32和pET3a-ngfmu,分彆轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態,IPTG誘導錶達,收集菌體,SDS -PAGE檢測其錶達量的改變.結果:構建的pET3a-ngfp32和pET3a-ngfnu錶達載體酶切和測序結果正確,SDS-PAGE結果顯示,與在重組菌pET3a-NGF總蛋白中的錶達量相比,目的蛋白rh-3-NGF在重組菌pET3a-NGFP32和pET3a-NGFmu中的錶達量均明顯增高,併且在重組菌pET3a-NGFmu中的錶達量高于重組菌pET3a-NGFP32.結論:目的蛋白rh-3-NGF在重組菌pET3a-NGFP32和pET3a-NGFmu中錶達量的增高,說明人β-ngf基因中稀有密碼子和mRNA的二級結構對其在大腸桿菌中的錶達有較為明顯的影響,結果為構建rh-3-NGF的大腸桿菌工程菌株奠定瞭基礎.
목적:연구인β신경생장인자(3-NGF)기인중희유밀마자급기mRNA이급결구대기재대장간균중표체량적영향.방법:근거대인β-ngf중희유밀마자급기mRNA이급결구적연구,동의돌변인β-ngf기인,통과PCR득도인β-ngf적5 ′단동의돌변기인rh-β-ngfp2화전동의돌변기인rh-β-ngfinu,장저2개서렬극륭입재체pET3a중,득도중조질립pET3a-ngfp32화pET3a-ngfmu,분별전화대장간균BL21(DE3)감수태,IPTG유도표체,수집균체,SDS -PAGE검측기표체량적개변.결과:구건적pET3a-ngfp32화pET3a-ngfnu표체재체매절화측서결과정학,SDS-PAGE결과현시,여재중조균pET3a-NGF총단백중적표체량상비,목적단백rh-3-NGF재중조균pET3a-NGFP32화pET3a-NGFmu중적표체량균명현증고,병차재중조균pET3a-NGFmu중적표체량고우중조균pET3a-NGFP32.결론:목적단백rh-3-NGF재중조균pET3a-NGFP32화pET3a-NGFmu중표체량적증고,설명인β-ngf기인중희유밀마자화mRNA적이급결구대기재대장간균중적표체유교위명현적영향,결과위구건rh-3-NGF적대장간균공정균주전정료기출.
