国际遗传学杂志
國際遺傳學雜誌
국제유전학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF GENETICS
2006年
2期
94-97
,共4页
王佳曦%孟祥宁%刘改云%赵育桢%王哲%白静%傅松滨
王佳晞%孟祥寧%劉改雲%趙育楨%王哲%白靜%傅鬆濱
왕가희%맹상저%류개운%조육정%왕철%백정%부송빈
siRNA%RNAi%FAK%基因表达抑制
siRNA%RNAi%FAK%基因錶達抑製
siRNA%RNAi%FAK%기인표체억제
目的应用RNA干扰技术,构建针对FAK的siRNA表达载体,抑制肺巨细胞癌细胞BE-1中FAK的表达.方法依据设计siRNA的原则,针对人FAK的mRNA序列,设计并合成编码siRNA的两条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆到pSilencerTM2.1-U6真核表达载体中构建重组体pSilencerFAK,进行测序鉴定.然后转染重组体至BE-1细胞中,经G418筛选,以空质粒转染为对照,获得稳定转染克隆,运用Western印迹检测FAK基因的表达.结果测序证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pSilen-cerTM2.1-U6载体中,pSilencer-FAK转染细胞后,FAK基因在蛋白水平的表达量受到明显抑制.结论成功构建了针对人FAK的siRNA表达载体,通过转染BE-1细胞,可有效抑制细胞中FAK的表达,为后续研究以及肺癌的基因治疗奠定了基础.
目的應用RNA榦擾技術,構建針對FAK的siRNA錶達載體,抑製肺巨細胞癌細胞BE-1中FAK的錶達.方法依據設計siRNA的原則,針對人FAK的mRNA序列,設計併閤成編碼siRNA的兩條寡覈苷痠序列,經退火成互補雙鏈,再剋隆到pSilencerTM2.1-U6真覈錶達載體中構建重組體pSilencerFAK,進行測序鑒定.然後轉染重組體至BE-1細胞中,經G418篩選,以空質粒轉染為對照,穫得穩定轉染剋隆,運用Western印跡檢測FAK基因的錶達.結果測序證實目的寡覈苷痠片段已被剋隆到pSilen-cerTM2.1-U6載體中,pSilencer-FAK轉染細胞後,FAK基因在蛋白水平的錶達量受到明顯抑製.結論成功構建瞭針對人FAK的siRNA錶達載體,通過轉染BE-1細胞,可有效抑製細胞中FAK的錶達,為後續研究以及肺癌的基因治療奠定瞭基礎.
목적응용RNA간우기술,구건침대FAK적siRNA표체재체,억제폐거세포암세포BE-1중FAK적표체.방법의거설계siRNA적원칙,침대인FAK적mRNA서렬,설계병합성편마siRNA적량조과핵감산서렬,경퇴화성호보쌍련,재극륭도pSilencerTM2.1-U6진핵표체재체중구건중조체pSilencerFAK,진행측서감정.연후전염중조체지BE-1세포중,경G418사선,이공질립전염위대조,획득은정전염극륭,운용Western인적검측FAK기인적표체.결과측서증실목적과핵감산편단이피극륭도pSilen-cerTM2.1-U6재체중,pSilencer-FAK전염세포후,FAK기인재단백수평적표체량수도명현억제.결론성공구건료침대인FAK적siRNA표체재체,통과전염BE-1세포,가유효억제세포중FAK적표체,위후속연구이급폐암적기인치료전정료기출.
