解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2005年
2期
221-223
,共3页
蒋毅%陈实平%董红燕%冯长访%王保君
蔣毅%陳實平%董紅燕%馮長訪%王保君
장의%진실평%동홍연%풍장방%왕보군
SARS冠状病毒%核壳蛋白%单克隆抗体%双抗体夹心
SARS冠狀病毒%覈殼蛋白%單剋隆抗體%雙抗體夾心
SARS관상병독%핵각단백%단극륭항체%쌍항체협심
目的制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具.方法以重组SARS-CoV N蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体.通过间接酶联免疫分析、间接免疫荧光、免疫双向扩散等方法鉴定抗体的特异性、亲和力、类型及亚类、配对效果等.结果共获得15个阳性克隆,其中10个与天然SARS-CoV呈阳性反应.10株单抗的相对亲和常数在108～109mo1/L-1之间;10株中有1株为IgG2b、1株为IgG3,其余均为IgG1;10株单抗中有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与流感病毒A、B,副流感病毒有交叉反应,l株与流感病毒A、B有交叉反应;10株单抗中的5株可形成5种配对,其中两种配对用于检测重组SARS病毒N蛋白,灵敏度可达1 μg/L.结论获得了特异性针对SARS冠状病毒N蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测SARS-CoV N蛋白的酶联双抗体夹心法,为SARS的早期诊断、蛋白质组学的研究奠定了基础.
目的製備嚴重急性呼吸道綜閤徵(SARS)冠狀病毒(CoV)覈殼(N)蛋白單剋隆抗體,為尋求SARS早期診斷的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具.方法以重組SARS-CoV N蛋白免疫小鼠,採用甲基纖維素半固體培養基法製備單剋隆抗體.通過間接酶聯免疫分析、間接免疫熒光、免疫雙嚮擴散等方法鑒定抗體的特異性、親和力、類型及亞類、配對效果等.結果共穫得15箇暘性剋隆,其中10箇與天然SARS-CoV呈暘性反應.10株單抗的相對親和常數在108～109mo1/L-1之間;10株中有1株為IgG2b、1株為IgG3,其餘均為IgG1;10株單抗中有8株與12種肺炎相關的病原體無交扠反應,1株與流感病毒A、B,副流感病毒有交扠反應,l株與流感病毒A、B有交扠反應;10株單抗中的5株可形成5種配對,其中兩種配對用于檢測重組SARS病毒N蛋白,靈敏度可達1 μg/L.結論穫得瞭特異性針對SARS冠狀病毒N蛋白的單剋隆抗體,併初步建立瞭檢測SARS-CoV N蛋白的酶聯雙抗體夾心法,為SARS的早期診斷、蛋白質組學的研究奠定瞭基礎.
목적제비엄중급성호흡도종합정(SARS)관상병독(CoV)핵각(N)단백단극륭항체,위심구SARS조기진단적방법급심입연구SARS질병제공유력적공구.방법이중조SARS-CoV N단백면역소서,채용갑기섬유소반고체배양기법제비단극륭항체.통과간접매련면역분석、간접면역형광、면역쌍향확산등방법감정항체적특이성、친화력、류형급아류、배대효과등.결과공획득15개양성극륭,기중10개여천연SARS-CoV정양성반응.10주단항적상대친화상수재108～109mo1/L-1지간;10주중유1주위IgG2b、1주위IgG3,기여균위IgG1;10주단항중유8주여12충폐염상관적병원체무교차반응,1주여류감병독A、B,부류감병독유교차반응,l주여류감병독A、B유교차반응;10주단항중적5주가형성5충배대,기중량충배대용우검측중조SARS병독N단백,령민도가체1 μg/L.결론획득료특이성침대SARS관상병독N단백적단극륭항체,병초보건립료검측SARS-CoV N단백적매련쌍항체협심법,위SARS적조기진단、단백질조학적연구전정료기출.
