哈尔滨医科大学学报
哈爾濱醫科大學學報
합이빈의과대학학보
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
2005年
3期
208-210
,共3页
李妍%周海舟%服部俊夫%凌虹
李妍%週海舟%服部俊伕%凌虹
리연%주해주%복부준부%릉홍
HIV-1%V3环%缺失%重叠延伸剪接法
HIV-1%V3環%缺失%重疊延伸剪接法
HIV-1%V3배%결실%중첩연신전접법
目的构建V3环缺失的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白表达体系.方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环缺失体的构建.得到的PCR产物经EcoRⅠ和 XhoⅠ双酶切,与pSM载体连接,构建HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环缺失的表达载体(pS M-ADAΔV3),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定.结果获得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环缺失体PCR产物,构建了其表达载体pSM-ADAΔV3,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR及基因测序结果显示重组质粒序列正确,为预期目的片段.结论成功构建了V3环缺失的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的表达载体 .此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV-1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础.
目的構建V3環缺失的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白錶達體繫.方法分彆設計包膜糖蛋白兩耑及V3環兩耑的兩對引物,採用重疊延伸剪接法,進行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3環缺失體的構建.得到的PCR產物經EcoRⅠ和 XhoⅠ雙酶切,與pSM載體連接,構建HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3環缺失的錶達載體(pS M-ADAΔV3),轉化大腸桿菌後篩選暘性剋隆,經PCR及基因序列測定進行鑒定.結果穫得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3環缺失體PCR產物,構建瞭其錶達載體pSM-ADAΔV3,經轉化和篩選穫得瞭重組菌,經PCR及基因測序結果顯示重組質粒序列正確,為預期目的片段.結論成功構建瞭V3環缺失的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的錶達載體 .此結果為進一步構建偽病毒,觀察V3環完全或部分缺失對病毒侵入靶細胞過程的影響,為開髮阻止HIV-1進入靶細胞的藥物或疫苗打下基礎.
목적구건V3배결실적HIV-1 ADA주포막당단백표체체계.방법분별설계포막당단백량단급V3배량단적량대인물,채용중첩연신전접법,진행HIV-1 ADA주포막당단백V3배결실체적구건.득도적PCR산물경EcoRⅠ화 XhoⅠ쌍매절,여pSM재체련접,구건HIV-1 ADA주포막당단백V3배결실적표체재체(pS M-ADAΔV3),전화대장간균후사선양성극륭,경PCR급기인서렬측정진행감정.결과획득HIV-1 ADA주포막당단백V3배결실체PCR산물,구건료기표체재체pSM-ADAΔV3,경전화화사선획득료중조균,경PCR급기인측서결과현시중조질립서렬정학,위예기목적편단.결론성공구건료V3배결실적HIV-1 ADA주포막당단백적표체재체 .차결과위진일보구건위병독,관찰V3배완전혹부분결실대병독침입파세포과정적영향,위개발조지HIV-1진입파세포적약물혹역묘타하기출.
