中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2005年
5期
32-35
,共4页
吴晓萍%李校堃%苏志坚%郑青%吴思娴
吳曉萍%李校堃%囌誌堅%鄭青%吳思嫻
오효평%리교곤%소지견%정청%오사한
人碱性成纤维细胞生长因子%定点突变%表达
人堿性成纖維細胞生長因子%定點突變%錶達
인감성성섬유세포생장인자%정점돌변%표체
用PCR法将人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因中编码第25、69和92位的半胱氨酸(Cys)密码子突变为丝氨酸(Ser)密码子,将突变的hbFGF cDNA片断与表达质粒pET3c连接,构建重组质粒pET3c-hbFGFSer25,69,92.hbFGFSer25,69,92在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达量大于30%.通过阳离子交换和肝素亲和层析两步纯化,得到纯度大于95%的hbFGFSer25,69,92.MTT法测定纯化的产物活性表明,hbFGFSer25,69,92突变体促Balb/c细胞增殖的活性与野生型hbFGF相当,为下一步对hbFGFSer25,69,92突变体进行定点化学修饰打下了基础.
用PCR法將人堿性成纖維細胞生長因子(hbFGF)基因中編碼第25、69和92位的半胱氨痠(Cys)密碼子突變為絲氨痠(Ser)密碼子,將突變的hbFGF cDNA片斷與錶達質粒pET3c連接,構建重組質粒pET3c-hbFGFSer25,69,92.hbFGFSer25,69,92在大腸桿菌BL21(DE3)中的錶達量大于30%.通過暘離子交換和肝素親和層析兩步純化,得到純度大于95%的hbFGFSer25,69,92.MTT法測定純化的產物活性錶明,hbFGFSer25,69,92突變體促Balb/c細胞增殖的活性與野生型hbFGF相噹,為下一步對hbFGFSer25,69,92突變體進行定點化學脩飾打下瞭基礎.
용PCR법장인감성성섬유세포생장인자(hbFGF)기인중편마제25、69화92위적반광안산(Cys)밀마자돌변위사안산(Ser)밀마자,장돌변적hbFGF cDNA편단여표체질립pET3c련접,구건중조질립pET3c-hbFGFSer25,69,92.hbFGFSer25,69,92재대장간균BL21(DE3)중적표체량대우30%.통과양리자교환화간소친화층석량보순화,득도순도대우95%적hbFGFSer25,69,92.MTT법측정순화적산물활성표명,hbFGFSer25,69,92돌변체촉Balb/c세포증식적활성여야생형hbFGF상당,위하일보대hbFGFSer25,69,92돌변체진행정점화학수식타하료기출.
