高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2005年
11期
63-68
,共6页
袁铁铮%姚斌%罗会颖%王亚茹%柏映国%伍宁丰%范云六
袁鐵錚%姚斌%囉會穎%王亞茹%柏映國%伍寧豐%範雲六
원철쟁%요빈%라회영%왕아여%백영국%오저봉%범운륙
高温酸性α-淀粉酶%巴斯德毕赤酵母%基因表达%多组分表达产物
高溫痠性α-澱粉酶%巴斯德畢赤酵母%基因錶達%多組分錶達產物
고온산성α-정분매%파사덕필적효모%기인표체%다조분표체산물
一种高温酸性α-淀粉酶基因经密码子优化后在巴斯德毕赤酵母中得到了高效表达,表达的重组α-淀粉酶rBD5063具有α-淀粉酶的活性,表达量达到60mg/L.对rBD5063进行了纯化并对多组分的表达产物进行了研究.rBD5063作用最适pH值为5.0,在pH3.5～10.0范围内酶活性保留50%以上,最适温度在105～110℃之间,在90℃下酶活性半衰期约30min.低浓度Ca2+对激活rBD5063活性和维持稳定性是必需的,高浓度对活性会产生轻微抑制作用,Mg2+、SDS和Trition X-100都能够部分抑制rBD5063活性,Cu2+和EDTA严重抑制rBD5063活性.表达产物水解可溶性淀粉主要产物是单糖和低聚寡糖.表达产物包括分子量分别是62、56、44kD的3种活性组分,在通常情况下主要以大分子量活性多聚体的形式存在.重组α-淀粉酶rBD5063不存在N-连接的糖基化,但是存在O-连接的糖基化现象,O-连接对rBD5063的热稳定性和最适温度没有显著影响.
一種高溫痠性α-澱粉酶基因經密碼子優化後在巴斯德畢赤酵母中得到瞭高效錶達,錶達的重組α-澱粉酶rBD5063具有α-澱粉酶的活性,錶達量達到60mg/L.對rBD5063進行瞭純化併對多組分的錶達產物進行瞭研究.rBD5063作用最適pH值為5.0,在pH3.5～10.0範圍內酶活性保留50%以上,最適溫度在105～110℃之間,在90℃下酶活性半衰期約30min.低濃度Ca2+對激活rBD5063活性和維持穩定性是必需的,高濃度對活性會產生輕微抑製作用,Mg2+、SDS和Trition X-100都能夠部分抑製rBD5063活性,Cu2+和EDTA嚴重抑製rBD5063活性.錶達產物水解可溶性澱粉主要產物是單糖和低聚寡糖.錶達產物包括分子量分彆是62、56、44kD的3種活性組分,在通常情況下主要以大分子量活性多聚體的形式存在.重組α-澱粉酶rBD5063不存在N-連接的糖基化,但是存在O-連接的糖基化現象,O-連接對rBD5063的熱穩定性和最適溫度沒有顯著影響.
일충고온산성α-정분매기인경밀마자우화후재파사덕필적효모중득도료고효표체,표체적중조α-정분매rBD5063구유α-정분매적활성,표체량체도60mg/L.대rBD5063진행료순화병대다조분적표체산물진행료연구.rBD5063작용최괄pH치위5.0,재pH3.5～10.0범위내매활성보류50%이상,최괄온도재105～110℃지간,재90℃하매활성반쇠기약30min.저농도Ca2+대격활rBD5063활성화유지은정성시필수적,고농도대활성회산생경미억제작용,Mg2+、SDS화Trition X-100도능구부분억제rBD5063활성,Cu2+화EDTA엄중억제rBD5063활성.표체산물수해가용성정분주요산물시단당화저취과당.표체산물포괄분자량분별시62、56、44kD적3충활성조분,재통상정황하주요이대분자량활성다취체적형식존재.중조α-정분매rBD5063불존재N-련접적당기화,단시존재O-련접적당기화현상,O-련접대rBD5063적열은정성화최괄온도몰유현저영향.
