CAJ | 학술논문

目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30 μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.
목적:건립경쟁성형광정량취합매련반응(CFQ-PCR),병탐토CFQ-PCR재을형간염병독(HBV)림상검측중적의의.방법:근거HBV병독adr아형기인조서렬합성일대HBV특이적인물,화일조특이적TaqMan탐침;근거상술인물서렬,채용분자극륭기술제비내대조DNA;재근거내대조서렬합성일조내대조DNA특이적여상술TaqMan탐침불동표기적TaqMan탐침;장괄량적내대조DNA가입도PCR반응체계중,사기여HBV파서렬공확증.결과:재30 μL CFQ-PCR반응체계중,가입약20고패내대조DNA능구은정지획득공확증곡선;경경지당응효전영분석,가입약100-500고패내대조DNA능구유효지획득공확증산물조대신호;재210개림상HBsAg양성혈청표본적CFQ-PCR확증중식별출8개미능유효확증적표본,60빈HBsAg음성혈청표본중식별출2개내대조미능유효확증적표본,후경DNA순화처리,상술전부표본적내대조균획득양성확증결과,기중유7개HBsAg양성혈청표본획득HBV DNA확증양성결과.결론:CFQ-PCR능구유효지제시림상표본HBV DNA체외확증시유우확증실패도치적가음성,괄합림상추엄응용.