中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2009年
7期
572-576
,共5页
曹培丽%李媛%陈超%郭丹%辛九庆%李继昌
曹培麗%李媛%陳超%郭丹%辛九慶%李繼昌
조배려%리원%진초%곽단%신구경%리계창
猪肺炎支原体%P52蛋白%原核表达%抗血清
豬肺炎支原體%P52蛋白%原覈錶達%抗血清
저폐염지원체%P52단백%원핵표체%항혈청
为表达猪肺炎支原体(Mhp)P52蛋白及制备其血清,本实验利用PCR从Mhp J株扩增P52基因,克隆到表达载体pET-30a中,获得重组质粒pET-P52,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE和western blot检测重组蛋白表达及其免疫学活性.以该重组蛋白为抗原免疫兔制备抗血清,采用间接ELISA检测抗血清效价,并利用抗血清通过间接免疫荧光检测P52基因在AD-293细胞中的表达情况.结果表明,PCR扩增目的基因为1 202 bp,SDS-PAGE检测重组蛋白大小约52 ku,其表达量占菌体总蛋白的28%.Western blot检测表明,目的蛋白能与Mhp阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫活性.间接免疫荧光检测到P52基因在AD-293细胞中表达.本研究为构建P52蛋白腺病毒载体疫苗奠定了基础.
為錶達豬肺炎支原體(Mhp)P52蛋白及製備其血清,本實驗利用PCR從Mhp J株擴增P52基因,剋隆到錶達載體pET-30a中,穫得重組質粒pET-P52,經IPTG誘導,通過SDS-PAGE和western blot檢測重組蛋白錶達及其免疫學活性.以該重組蛋白為抗原免疫兔製備抗血清,採用間接ELISA檢測抗血清效價,併利用抗血清通過間接免疫熒光檢測P52基因在AD-293細胞中的錶達情況.結果錶明,PCR擴增目的基因為1 202 bp,SDS-PAGE檢測重組蛋白大小約52 ku,其錶達量佔菌體總蛋白的28%.Western blot檢測錶明,目的蛋白能與Mhp暘性血清髮生特異性反應,具有良好的免疫活性.間接免疫熒光檢測到P52基因在AD-293細胞中錶達.本研究為構建P52蛋白腺病毒載體疫苗奠定瞭基礎.
위표체저폐염지원체(Mhp)P52단백급제비기혈청,본실험이용PCR종Mhp J주확증P52기인,극륭도표체재체pET-30a중,획득중조질립pET-P52,경IPTG유도,통과SDS-PAGE화western blot검측중조단백표체급기면역학활성.이해중조단백위항원면역토제비항혈청,채용간접ELISA검측항혈청효개,병이용항혈청통과간접면역형광검측P52기인재AD-293세포중적표체정황.결과표명,PCR확증목적기인위1 202 bp,SDS-PAGE검측중조단백대소약52 ku,기표체량점균체총단백적28%.Western blot검측표명,목적단백능여Mhp양성혈청발생특이성반응,구유량호적면역활성.간접면역형광검측도P52기인재AD-293세포중표체.본연구위구건P52단백선병독재체역묘전정료기출.