中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2010年
4期
483-486
,共4页
陈彦福%宋彩霞%王全%欧树安%严明总
陳彥福%宋綵霞%王全%歐樹安%嚴明總
진언복%송채하%왕전%구수안%엄명총
胰腺癌%Slug%干扰%肿瘤转移%血管生成
胰腺癌%Slug%榦擾%腫瘤轉移%血管生成
이선암%Slug%간우%종류전이%혈관생성
目的 探讨siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌转移、血管生成和生长的影响.方法 用脂质体转染法将表达siRNA-Slug的真核表达载体pGenesil-1-Slug-siRNA (pSlug-siRNA)和空载体pGenesil-1-Neg-siRNA (pNeg-siRNA)导入ASPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.采用RT-PCR技术检测不同处理组细胞中Slug mRNA表达水平,Western-blot测定Slug蛋白表达水平.观察Slug沉默后及对体外胰腺癌细胞侵袭作用的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验及CAM移植瘤实验检测Slug沉默对血管生成的影响,MTT比色法检测细胞存活率.结果 pSlug-siRNA组细胞内Slug表达被有效沉默.重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,pSlug-siRNA组、对照组、pNeg-siRNA组穿透基底膜细胞数分别为(38±6.56) 、(164±15.39)、(159.67±8.96)个/高倍镜(×200),差异分别有统计学意义(P＜0.05).体外实验表明,AsPC-1细胞内Slug表达沉默后,血管密度明显降低,血管生成被抑制,细胞存活率明显降低.结论 RNA干扰Slug基因抑制胰腺癌细胞生长、侵袭转移和血管生成,Slug可能成为胰腺癌基因治疗的新靶点.
目的 探討siRNA榦擾Slug基因錶達對胰腺癌轉移、血管生成和生長的影響.方法 用脂質體轉染法將錶達siRNA-Slug的真覈錶達載體pGenesil-1-Slug-siRNA (pSlug-siRNA)和空載體pGenesil-1-Neg-siRNA (pNeg-siRNA)導入ASPC-1細胞,G418篩選暘性細胞,穫得穩定轉染的暘性剋隆.採用RT-PCR技術檢測不同處理組細胞中Slug mRNA錶達水平,Western-blot測定Slug蛋白錶達水平.觀察Slug沉默後及對體外胰腺癌細胞侵襲作用的影響;鷄胚絨毛尿囊膜(CAM)試驗及CAM移植瘤實驗檢測Slug沉默對血管生成的影響,MTT比色法檢測細胞存活率.結果 pSlug-siRNA組細胞內Slug錶達被有效沉默.重組細胞基底膜(Matrigel)侵襲實驗顯示,pSlug-siRNA組、對照組、pNeg-siRNA組穿透基底膜細胞數分彆為(38±6.56) 、(164±15.39)、(159.67±8.96)箇/高倍鏡(×200),差異分彆有統計學意義(P＜0.05).體外實驗錶明,AsPC-1細胞內Slug錶達沉默後,血管密度明顯降低,血管生成被抑製,細胞存活率明顯降低.結論 RNA榦擾Slug基因抑製胰腺癌細胞生長、侵襲轉移和血管生成,Slug可能成為胰腺癌基因治療的新靶點.
목적 탐토siRNA간우Slug기인표체대이선암전이、혈관생성화생장적영향.방법 용지질체전염법장표체siRNA-Slug적진핵표체재체pGenesil-1-Slug-siRNA (pSlug-siRNA)화공재체pGenesil-1-Neg-siRNA (pNeg-siRNA)도입ASPC-1세포,G418사선양성세포,획득은정전염적양성극륭.채용RT-PCR기술검측불동처리조세포중Slug mRNA표체수평,Western-blot측정Slug단백표체수평.관찰Slug침묵후급대체외이선암세포침습작용적영향;계배융모뇨낭막(CAM)시험급CAM이식류실험검측Slug침묵대혈관생성적영향,MTT비색법검측세포존활솔.결과 pSlug-siRNA조세포내Slug표체피유효침묵.중조세포기저막(Matrigel)침습실험현시,pSlug-siRNA조、대조조、pNeg-siRNA조천투기저막세포수분별위(38±6.56) 、(164±15.39)、(159.67±8.96)개/고배경(×200),차이분별유통계학의의(P＜0.05).체외실험표명,AsPC-1세포내Slug표체침묵후,혈관밀도명현강저,혈관생성피억제,세포존활솔명현강저.결론 RNA간우Slug기인억제이선암세포생장、침습전이화혈관생성,Slug가능성위이선암기인치료적신파점.
