CAJ | 학술논문

目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B) 反义寡核苷酸对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞(AST)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α及释放谷氨酸(Glu)的影响.方法:取新生2 ～ 3 d新生的SD大鼠L4 ～ 6脊髓背角AST细胞原代纯化培养,C 组:正常对照,除加入与干预组等量的培养液外不加任何药物;脂多糖(LPS)组:在培养液中加入LPS,终浓度为1 mg/L,孵育24 h;SNR2B组:在培养液中加入经lipofectamine2000处理的NR2B反义寡核苷酸,终浓度为2 μmol/L,孵育48 h后再加入LPS,终浓度1 mg/L,再孵育24 h;ANR2B组:在培养液中加入经lipofectamine2000处理的NR2B正义寡核苷酸,终浓度为2 μmol/L,孵育72 h后再加入LPS,终浓度1 mg/L,孵育24 h;5 000 r/min离心15 min后取上清液和细胞,分别用于TNF-α、Glu和NR2B mRNA检测.应用酶联免疫吸附法(ELISA) 检测上清液中TNF-α的浓度;用高效液相色谱仪测定Glu含量,RT-PCR检测NR2B mRNA的表达.结果:与C组比较,LPS组和ANR2B组释放的TNF-α和Glu显著增加(P ＜ 0.01),而SNR2B组无显著变化;与LPS组和ANR2B组相比,SNR2B组释放的TNF-α和Glu减少(P ＜ 0.01).与C组比较,LPS组和ANR2B组AST细胞的NR2B mRNA的表达显著升高(P ＜ 0.01),而SNR2B组差异无显著性.结论:NR2B反义寡核苷酸下调脊髓AST细胞NR2B mRNA 表达,减少TNF-α和Glu的释放.
목적:관찰N-갑기-D-천동안산수체2B아기(NR2B) 반의과핵감산대체외배양적대서척수성형효질세포(AST)분비종류배사인자(TNF)-α급석방곡안산(Glu)적영향.방법:취신생2 ～ 3 d신생적SD대서L4 ～ 6척수배각AST세포원대순화배양,C 조:정상대조,제가입여간예조등량적배양액외불가임하약물;지다당(LPS)조:재배양액중가입LPS,종농도위1 mg/L,부육24 h;SNR2B조:재배양액중가입경lipofectamine2000처리적NR2B반의과핵감산,종농도위2 μmol/L,부육48 h후재가입LPS,종농도1 mg/L,재부육24 h;ANR2B조:재배양액중가입경lipofectamine2000처리적NR2B정의과핵감산,종농도위2 μmol/L,부육72 h후재가입LPS,종농도1 mg/L,부육24 h;5 000 r/min리심15 min후취상청액화세포,분별용우TNF-α、Glu화NR2B mRNA검측.응용매련면역흡부법(ELISA) 검측상청액중TNF-α적농도;용고효액상색보의측정Glu함량,RT-PCR검측NR2B mRNA적표체.결과:여C조비교,LPS조화ANR2B조석방적TNF-α화Glu현저증가(P ＜ 0.01),이SNR2B조무현저변화;여LPS조화ANR2B조상비,SNR2B조석방적TNF-α화Glu감소(P ＜ 0.01).여C조비교,LPS조화ANR2B조AST세포적NR2B mRNA적표체현저승고(P ＜ 0.01),이SNR2B조차이무현저성.결론:NR2B반의과핵감산하조척수AST세포NR2B mRNA 표체,감소TNF-α화Glu적석방.