中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2011年
1期
23-28
,共6页
曲宪成%尚晓莉%程翠%曲学伟%张勇%张开岳%蒋骄云
麯憲成%尚曉莉%程翠%麯學偉%張勇%張開嶽%蔣驕雲
곡헌성%상효리%정취%곡학위%장용%장개악%장교운
黄鳝%性腺%抑制性差减杂交%差减cDNA文库
黃鱔%性腺%抑製性差減雜交%差減cDNA文庫
황선%성선%억제성차감잡교%차감cDNA문고
应用抑制性差减杂交技术构建了黄鳝(Monopterus albus)Ⅳ期卵巢和间期性腺的差减cDNA文库.正向差减杂交以间期性腺为试验方,Ⅳ期卵巢为驱动方;反向差减杂交以Ⅳ期卵巢为试验方,间期性腺为驱动方.将获得的差减cDNA片段连接质粒载体,然后转化大肠杆菌DH5α,最后获得的正、反向差减文库分别含461、678个重组子.经PCR扩增鉴定插入片段范嗣为200～2000 bp.随机选取正、反文库共100个阳性克隆测序分析,得到90个有效基因片段,与GenBank进行BLASTx和BLASTn同源比对.进一步从文库中选取2个基因用于半定量RT-PCR,对文库质量进行验证.结果表明,所建文库能够达到富集这两期性腺差异表达基因的目的.黄鳝性腺差减文库的构建,为进一步分离、鉴定黄鳝性腺发育和性逆转的相关基因奠定了基础.
應用抑製性差減雜交技術構建瞭黃鱔(Monopterus albus)Ⅳ期卵巢和間期性腺的差減cDNA文庫.正嚮差減雜交以間期性腺為試驗方,Ⅳ期卵巢為驅動方;反嚮差減雜交以Ⅳ期卵巢為試驗方,間期性腺為驅動方.將穫得的差減cDNA片段連接質粒載體,然後轉化大腸桿菌DH5α,最後穫得的正、反嚮差減文庫分彆含461、678箇重組子.經PCR擴增鑒定插入片段範嗣為200～2000 bp.隨機選取正、反文庫共100箇暘性剋隆測序分析,得到90箇有效基因片段,與GenBank進行BLASTx和BLASTn同源比對.進一步從文庫中選取2箇基因用于半定量RT-PCR,對文庫質量進行驗證.結果錶明,所建文庫能夠達到富集這兩期性腺差異錶達基因的目的.黃鱔性腺差減文庫的構建,為進一步分離、鑒定黃鱔性腺髮育和性逆轉的相關基因奠定瞭基礎.
응용억제성차감잡교기술구건료황선(Monopterus albus)Ⅳ기란소화간기성선적차감cDNA문고.정향차감잡교이간기성선위시험방,Ⅳ기란소위구동방;반향차감잡교이Ⅳ기란소위시험방,간기성선위구동방.장획득적차감cDNA편단련접질립재체,연후전화대장간균DH5α,최후획득적정、반향차감문고분별함461、678개중조자.경PCR확증감정삽입편단범사위200～2000 bp.수궤선취정、반문고공100개양성극륭측서분석,득도90개유효기인편단,여GenBank진행BLASTx화BLASTn동원비대.진일보종문고중선취2개기인용우반정량RT-PCR,대문고질량진행험증.결과표명,소건문고능구체도부집저량기성선차이표체기인적목적.황선성선차감문고적구건,위진일보분리、감정황선성선발육화성역전적상관기인전정료기출.
