西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2011年
8期
1524-1530
,共7页
李学俊%郭彦飞%闫倩%陈鹏
李學俊%郭彥飛%閆倩%陳鵬
리학준%곽언비%염천%진붕
苦养%类过敏原%原核表达%多克隆抗体
苦養%類過敏原%原覈錶達%多剋隆抗體
고양%류과민원%원핵표체%다극륭항체
以苦荞种子发育期全长cDNA文库中获得的与甜荞16 kD过敏原同源的基因BALP(Buckwheat Allergenlike protein,BALP; GenBank登录号GO496294)为基础,构建了原核表达载体pET47b-BALP,实现了在大肠杆菌Rosetta gami2 (DE3)中的高效表达,并对诱导表达的时间和IPTG的浓度进行了优化.利用钴离子螯合层析纯化了重组蛋白并制备了高效价的抗BALP多克隆抗体.结果表明,克隆的该苦荞类过敏原与已报道的甜荞16 kD过敏原在氨基酸序列上具有83％的相似性,该苦荞类过敏原以包涵体的形式表达,最佳诱导时间为6h,IPTG浓度为0.4 mmol/L.Western blotting显示天然的BALP仅存在于苦养种子的清蛋白中.原核表达体系的建立和多克隆抗体的制备为进一步探讨BALP在苦养麦中的功能以及研究BALP结构与功能的关系奠定了基础.
以苦蕎種子髮育期全長cDNA文庫中穫得的與甜蕎16 kD過敏原同源的基因BALP(Buckwheat Allergenlike protein,BALP; GenBank登錄號GO496294)為基礎,構建瞭原覈錶達載體pET47b-BALP,實現瞭在大腸桿菌Rosetta gami2 (DE3)中的高效錶達,併對誘導錶達的時間和IPTG的濃度進行瞭優化.利用鈷離子螯閤層析純化瞭重組蛋白併製備瞭高效價的抗BALP多剋隆抗體.結果錶明,剋隆的該苦蕎類過敏原與已報道的甜蕎16 kD過敏原在氨基痠序列上具有83％的相似性,該苦蕎類過敏原以包涵體的形式錶達,最佳誘導時間為6h,IPTG濃度為0.4 mmol/L.Western blotting顯示天然的BALP僅存在于苦養種子的清蛋白中.原覈錶達體繫的建立和多剋隆抗體的製備為進一步探討BALP在苦養麥中的功能以及研究BALP結構與功能的關繫奠定瞭基礎.
이고교충자발육기전장cDNA문고중획득적여첨교16 kD과민원동원적기인BALP(Buckwheat Allergenlike protein,BALP; GenBank등록호GO496294)위기출,구건료원핵표체재체pET47b-BALP,실현료재대장간균Rosetta gami2 (DE3)중적고효표체,병대유도표체적시간화IPTG적농도진행료우화.이용고리자오합층석순화료중조단백병제비료고효개적항BALP다극륭항체.결과표명,극륭적해고교류과민원여이보도적첨교16 kD과민원재안기산서렬상구유83％적상사성,해고교류과민원이포함체적형식표체,최가유도시간위6h,IPTG농도위0.4 mmol/L.Western blotting현시천연적BALP부존재우고양충자적청단백중.원핵표체체계적건립화다극륭항체적제비위진일보탐토BALP재고양맥중적공능이급연구BALP결구여공능적관계전정료기출.
