生物安全学报
生物安全學報
생물안전학보
Journal of Biosafety
2011年
3期
198-206
,共9页
蒋兴川%和淑琪%杨明%李正跃%桂富荣
蔣興川%和淑琪%楊明%李正躍%桂富榮
장흥천%화숙기%양명%리정약%계부영
西花蓟马%ISSR-PCR%反应体系%单因素试验%正交设计试验
西花薊馬%ISSR-PCR%反應體繫%單因素試驗%正交設計試驗
서화계마%ISSR-PCR%반응체계%단인소시험%정교설계시험
[背景]西花蓟马是近年来在我国局部地区暴发成灾的重要入侵害虫.[方法]本文通过改进的STE法提取西花蓟马的基因组DNA,对西花蓟马ISSR-PCR反应体系中的DNA、引物、Taq聚合酶、buffer缓冲液、dNTPs、Mg2+和去离子甲酰胺等7个影响因素进行了单因素试验,初步筛选出各因素的较优浓度；然后对影响较大的4个因素进行了正交设计试验L16 (44),建立了适合西花蓟马ISSR分子标记的最佳反应体系.[结果]在20 μL的反应体系中包含模板DNA 30 ng、10 × Buffer2.0 μL、引物1.05μmol·L-1、Taq聚合酶2.0 U、dNTPs 212.5 μmol·L-1及MgSO4 2.25 mmol· L-1.[结论与意义]利用采自云南昆明、玉溪、楚雄、红河、保山、昭通、丽江、大理和普洱9个地方的西花蓟马样本对所建立的反应体系进行检验,结果表明优化后的体系适用于西花蓟马的遗传多样性分析,本研究可为进一步研究西花蓟马的种群结构奠定基础.
[揹景]西花薊馬是近年來在我國跼部地區暴髮成災的重要入侵害蟲.[方法]本文通過改進的STE法提取西花薊馬的基因組DNA,對西花薊馬ISSR-PCR反應體繫中的DNA、引物、Taq聚閤酶、buffer緩遲液、dNTPs、Mg2+和去離子甲酰胺等7箇影響因素進行瞭單因素試驗,初步篩選齣各因素的較優濃度；然後對影響較大的4箇因素進行瞭正交設計試驗L16 (44),建立瞭適閤西花薊馬ISSR分子標記的最佳反應體繫.[結果]在20 μL的反應體繫中包含模闆DNA 30 ng、10 × Buffer2.0 μL、引物1.05μmol·L-1、Taq聚閤酶2.0 U、dNTPs 212.5 μmol·L-1及MgSO4 2.25 mmol· L-1.[結論與意義]利用採自雲南昆明、玉溪、楚雄、紅河、保山、昭通、麗江、大理和普洱9箇地方的西花薊馬樣本對所建立的反應體繫進行檢驗,結果錶明優化後的體繫適用于西花薊馬的遺傳多樣性分析,本研究可為進一步研究西花薊馬的種群結構奠定基礎.
[배경]서화계마시근년래재아국국부지구폭발성재적중요입침해충.[방법]본문통과개진적STE법제취서화계마적기인조DNA,대서화계마ISSR-PCR반응체계중적DNA、인물、Taq취합매、buffer완충액、dNTPs、Mg2+화거리자갑선알등7개영향인소진행료단인소시험,초보사선출각인소적교우농도；연후대영향교대적4개인소진행료정교설계시험L16 (44),건립료괄합서화계마ISSR분자표기적최가반응체계.[결과]재20 μL적반응체계중포함모판DNA 30 ng、10 × Buffer2.0 μL、인물1.05μmol·L-1、Taq취합매2.0 U、dNTPs 212.5 μmol·L-1급MgSO4 2.25 mmol· L-1.[결론여의의]이용채자운남곤명、옥계、초웅、홍하、보산、소통、려강、대리화보이9개지방적서화계마양본대소건립적반응체계진행검험,결과표명우화후적체계괄용우서화계마적유전다양성분석,본연구가위진일보연구서화계마적충군결구전정기출.
