家畜生态学报
傢畜生態學報
가축생태학보
ACTA ECOLOGAE ANIMALIS DOMASTICI
2012年
3期
13-18
,共6页
周光现%常馨月%阚靖博%张恩平
週光現%常馨月%闞靖博%張恩平
주광현%상형월%감정박%장은평
秦川牛%肌肉生长抑制素%克隆%原核表达%蛋白印迹
秦川牛%肌肉生長抑製素%剋隆%原覈錶達%蛋白印跡
진천우%기육생장억제소%극륭%원핵표체%단백인적
试验旨在通过基因工程方法获得重组肌肉生长抑制素蛋白.提取秦川牛的骨骼肌总RNA,根据基因库中海福特牛肌肉生长抑制素基因序列设计合成特异性引物,引物两端分别加上BamH I和Xho I酶切位点及保护碱基,用RT-PCR方法扩增肌肉生长抑制素全长基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,测序后经BamH I和Xho I双酶切,将目的片段插入到PGEX-4T-1中,构建原核表达载体PGEX-4T-1-M,将重组表达质粒转化至Rosetta(DE3)中诱导表达.结果表明,扩增的秦川牛肌肉生长抑制素全长基因1 128 bp,克隆载体经过DNA序列测定,所得基因与GenBank上发表的一致；成功构建原核表达载体PGEX-4T-1-M,经IPTG诱导,表达出了GST-M融合蛋白,用GST标签抗体做Western blotting印记证明产物大约69 ku,与预期大小相符,并在Rosetta(DE3)菌中成功的进行融合蛋白表达.
試驗旨在通過基因工程方法穫得重組肌肉生長抑製素蛋白.提取秦川牛的骨骼肌總RNA,根據基因庫中海福特牛肌肉生長抑製素基因序列設計閤成特異性引物,引物兩耑分彆加上BamH I和Xho I酶切位點及保護堿基,用RT-PCR方法擴增肌肉生長抑製素全長基因,併將其剋隆到pMD18-T載體上,測序後經BamH I和Xho I雙酶切,將目的片段插入到PGEX-4T-1中,構建原覈錶達載體PGEX-4T-1-M,將重組錶達質粒轉化至Rosetta(DE3)中誘導錶達.結果錶明,擴增的秦川牛肌肉生長抑製素全長基因1 128 bp,剋隆載體經過DNA序列測定,所得基因與GenBank上髮錶的一緻；成功構建原覈錶達載體PGEX-4T-1-M,經IPTG誘導,錶達齣瞭GST-M融閤蛋白,用GST標籤抗體做Western blotting印記證明產物大約69 ku,與預期大小相符,併在Rosetta(DE3)菌中成功的進行融閤蛋白錶達.
시험지재통과기인공정방법획득중조기육생장억제소단백.제취진천우적골격기총RNA,근거기인고중해복특우기육생장억제소기인서렬설계합성특이성인물,인물량단분별가상BamH I화Xho I매절위점급보호감기,용RT-PCR방법확증기육생장억제소전장기인,병장기극륭도pMD18-T재체상,측서후경BamH I화Xho I쌍매절,장목적편단삽입도PGEX-4T-1중,구건원핵표체재체PGEX-4T-1-M,장중조표체질립전화지Rosetta(DE3)중유도표체.결과표명,확증적진천우기육생장억제소전장기인1 128 bp,극륭재체경과DNA서렬측정,소득기인여GenBank상발표적일치；성공구건원핵표체재체PGEX-4T-1-M,경IPTG유도,표체출료GST-M융합단백,용GST표첨항체주Western blotting인기증명산물대약69 ku,여예기대소상부,병재Rosetta(DE3)균중성공적진행융합단백표체.
