中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
365-369
,共5页
姚伟%段丽娟%张岩锐%张英%任雅平%崔铁民
姚偉%段麗娟%張巖銳%張英%任雅平%崔鐵民
요위%단려연%장암예%장영%임아평%최철민
膜,人工%色谱法,离子交换%肝炎表面抗原,乙型
膜,人工%色譜法,離子交換%肝炎錶麵抗原,乙型
막,인공%색보법,리자교환%간염표면항원,을형
目的 评价离子交换膜层析方法纯化CHO 细胞表达的重组HBsAg 的效果以及该方法替代传统超速离心方法和离子交换柱层析方法的潜力.方法 取3 种不同纯化阶段的CHO 细胞C28 株表达的重组HBsAg 样品进行试验,样品1 为重组HBsAg 经疏水层析柱纯化而成,样品2 为样品1 再经超速离心而成,样品3 为样品2 再经凝胶过滤层析而成.分别采用小试级别离子交换膜层析系统SartobindQ MA75 down scale units 和中试级别离子交换膜层析系统Sartobind MultiSep ion exchange modules 对HBsAg 样品1 进行纯化,以HBsAg、总蛋白回收率及CHO 细胞残留蛋白含量评价纯化效果,并观察不同膜层析洗脱流速(60、120、180、240 cm/h)对离子交换膜层析系统HBsAg 载量和纯化效果的影响.采用离子交换膜层析系统SartobindQ MA75 down scale units 对3种不同纯化阶段的HBsAg 样品进行层析并比较纯化效果.每个批次样品的试验均重复3 次.结果 HBsAg 样品1 经两种SartobindQ 离子交换膜层析系统进行纯化的效果无明显区别,均可有效去除杂蛋白,CHO 细胞残留蛋白含量均低于0.05%,且HBsAg 的回收率均大于80%.在洗脱流速60 ～ 240 cm/h 范围内离子交换膜HBsAg 载量保持恒定,未见流速对纯化结果产生明显影响.3 种不同纯化阶段的HBsAg 样品经离子交换膜层析系统SartobindQ MA75 down scale units 纯化后均能达到满意的纯化效果,HBsAg 回收率分别为89.7%、92.3% 和94.1%,CHO 细胞残留蛋白含量分别为0.03%、0.02% 和0.01%.结论 离子交换膜层析方法对CHO 细胞表达的重组HBsAg 纯化效果良好,有望替代传统的超速离心方法和离子交换柱层析方法.
目的 評價離子交換膜層析方法純化CHO 細胞錶達的重組HBsAg 的效果以及該方法替代傳統超速離心方法和離子交換柱層析方法的潛力.方法 取3 種不同純化階段的CHO 細胞C28 株錶達的重組HBsAg 樣品進行試驗,樣品1 為重組HBsAg 經疏水層析柱純化而成,樣品2 為樣品1 再經超速離心而成,樣品3 為樣品2 再經凝膠過濾層析而成.分彆採用小試級彆離子交換膜層析繫統SartobindQ MA75 down scale units 和中試級彆離子交換膜層析繫統Sartobind MultiSep ion exchange modules 對HBsAg 樣品1 進行純化,以HBsAg、總蛋白迴收率及CHO 細胞殘留蛋白含量評價純化效果,併觀察不同膜層析洗脫流速(60、120、180、240 cm/h)對離子交換膜層析繫統HBsAg 載量和純化效果的影響.採用離子交換膜層析繫統SartobindQ MA75 down scale units 對3種不同純化階段的HBsAg 樣品進行層析併比較純化效果.每箇批次樣品的試驗均重複3 次.結果 HBsAg 樣品1 經兩種SartobindQ 離子交換膜層析繫統進行純化的效果無明顯區彆,均可有效去除雜蛋白,CHO 細胞殘留蛋白含量均低于0.05%,且HBsAg 的迴收率均大于80%.在洗脫流速60 ～ 240 cm/h 範圍內離子交換膜HBsAg 載量保持恆定,未見流速對純化結果產生明顯影響.3 種不同純化階段的HBsAg 樣品經離子交換膜層析繫統SartobindQ MA75 down scale units 純化後均能達到滿意的純化效果,HBsAg 迴收率分彆為89.7%、92.3% 和94.1%,CHO 細胞殘留蛋白含量分彆為0.03%、0.02% 和0.01%.結論 離子交換膜層析方法對CHO 細胞錶達的重組HBsAg 純化效果良好,有望替代傳統的超速離心方法和離子交換柱層析方法.
목적 평개리자교환막층석방법순화CHO 세포표체적중조HBsAg 적효과이급해방법체대전통초속리심방법화리자교환주층석방법적잠력.방법 취3 충불동순화계단적CHO 세포C28 주표체적중조HBsAg 양품진행시험,양품1 위중조HBsAg 경소수층석주순화이성,양품2 위양품1 재경초속리심이성,양품3 위양품2 재경응효과려층석이성.분별채용소시급별리자교환막층석계통SartobindQ MA75 down scale units 화중시급별리자교환막층석계통Sartobind MultiSep ion exchange modules 대HBsAg 양품1 진행순화,이HBsAg、총단백회수솔급CHO 세포잔류단백함량평개순화효과,병관찰불동막층석세탈류속(60、120、180、240 cm/h)대리자교환막층석계통HBsAg 재량화순화효과적영향.채용리자교환막층석계통SartobindQ MA75 down scale units 대3충불동순화계단적HBsAg 양품진행층석병비교순화효과.매개비차양품적시험균중복3 차.결과 HBsAg 양품1 경량충SartobindQ 리자교환막층석계통진행순화적효과무명현구별,균가유효거제잡단백,CHO 세포잔류단백함량균저우0.05%,차HBsAg 적회수솔균대우80%.재세탈류속60 ～ 240 cm/h 범위내리자교환막HBsAg 재량보지항정,미견류속대순화결과산생명현영향.3 충불동순화계단적HBsAg 양품경리자교환막층석계통SartobindQ MA75 down scale units 순화후균능체도만의적순화효과,HBsAg 회수솔분별위89.7%、92.3% 화94.1%,CHO 세포잔류단백함량분별위0.03%、0.02% 화0.01%.결론 리자교환막층석방법대CHO 세포표체적중조HBsAg 순화효과량호,유망체대전통적초속리심방법화리자교환주층석방법.
