中国卫生检验杂志
中國衛生檢驗雜誌
중국위생검험잡지
CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY
2008年
12期
2473-2476
,共4页
胡冬%李军锋%于虹%孙世惠%陈万荣%陈汝光%周育森
鬍鼕%李軍鋒%于虹%孫世惠%陳萬榮%陳汝光%週育森
호동%리군봉%우홍%손세혜%진만영%진여광%주육삼
肝细胞癌%人宫颈癌基因%原核表达%单克隆抗体
肝細胞癌%人宮頸癌基因%原覈錶達%單剋隆抗體
간세포암%인궁경암기인%원핵표체%단극륭항체
目的:克隆人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)的c末端截短序列(膜外区序列),重组表达并纯化HCCR-C端蛋白,制备和初步鉴定针对HCCR-C端蛋白的单克隆抗体.方法:从人肝癌细胞株HepG2中提取总RNA,RT-PCR扩增出HCCR-C端,构建其原核表达质粒,表达HCCR-C融合蛋白,以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,常规细胞融合和选择性培养,亚克隆筛选出分泌特异抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,Western blot、细胞组化初步鉴定抗HCCR-C端单克隆抗体.结果:成功克隆了HCCR-C末端截短序列,原核表达并纯化了HCCR-C端重组蛋白;经ELISA双筛,获得3株能稳定分泌抗HCCR-C端单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Western blot及细胞免疫荧光结果显示,其分泌抗体效价高且均能特异识别HCCR蛋白.结论:成功制备并初步鉴定了针对HCCR-C端的单克隆抗体,为深入研究HCCR蛋白的生物学功能和建立新的肝细胞癌早期诊断方法奠定了可靠基础.
目的:剋隆人宮頸癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)的c末耑截短序列(膜外區序列),重組錶達併純化HCCR-C耑蛋白,製備和初步鑒定針對HCCR-C耑蛋白的單剋隆抗體.方法:從人肝癌細胞株HepG2中提取總RNA,RT-PCR擴增齣HCCR-C耑,構建其原覈錶達質粒,錶達HCCR-C融閤蛋白,以純化的融閤蛋白免疫BALB/c小鼠,常規細胞融閤和選擇性培養,亞剋隆篩選齣分泌特異抗體的雜交瘤細胞株,製備單抗腹水,Western blot、細胞組化初步鑒定抗HCCR-C耑單剋隆抗體.結果:成功剋隆瞭HCCR-C末耑截短序列,原覈錶達併純化瞭HCCR-C耑重組蛋白;經ELISA雙篩,穫得3株能穩定分泌抗HCCR-C耑單剋隆抗體的雜交瘤細胞株;Western blot及細胞免疫熒光結果顯示,其分泌抗體效價高且均能特異識彆HCCR蛋白.結論:成功製備併初步鑒定瞭針對HCCR-C耑的單剋隆抗體,為深入研究HCCR蛋白的生物學功能和建立新的肝細胞癌早期診斷方法奠定瞭可靠基礎.
목적:극륭인궁경암기인(human cervical cancer oncogene,HCCR)적c말단절단서렬(막외구서렬),중조표체병순화HCCR-C단단백,제비화초보감정침대HCCR-C단단백적단극륭항체.방법:종인간암세포주HepG2중제취총RNA,RT-PCR확증출HCCR-C단,구건기원핵표체질립,표체HCCR-C융합단백,이순화적융합단백면역BALB/c소서,상규세포융합화선택성배양,아극륭사선출분비특이항체적잡교류세포주,제비단항복수,Western blot、세포조화초보감정항HCCR-C단단극륭항체.결과:성공극륭료HCCR-C말단절단서렬,원핵표체병순화료HCCR-C단중조단백;경ELISA쌍사,획득3주능은정분비항HCCR-C단단극륭항체적잡교류세포주;Western blot급세포면역형광결과현시,기분비항체효개고차균능특이식별HCCR단백.결론:성공제비병초보감정료침대HCCR-C단적단극륭항체,위심입연구HCCR단백적생물학공능화건립신적간세포암조기진단방법전정료가고기출.
