医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2009年
3期
208-213
,共6页
童睿%潘红春%马静静%朱国萍%郝家胜
童睿%潘紅春%馬靜靜%硃國萍%郝傢勝
동예%반홍춘%마정정%주국평%학가성
抗衰老蛋白%Klotho基因%GST融合蛋白%原核表达%多克隆抗体
抗衰老蛋白%Klotho基因%GST融閤蛋白%原覈錶達%多剋隆抗體
항쇠로단백%Klotho기인%GST융합단백%원핵표체%다극륭항체
目的 克隆小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因特异片段,制备小鼠Klotho多克隆抗体.方法 以小鼠基因组为模板进行PCR,克隆了小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因外显子Ⅳ部分序列,经BamHⅠ和NheⅠ双酶切后定向克隆到质粒pET-GST中,构建原核表达质粒pET-GST-Klotho,转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.以重组GST-Klotho融合蛋白免疫家兔, 制备Klotho多克隆抗体.结果 表达产物经SDS-PAGE检测表明,在大肠埃希菌中成功表达了GST-Klotho融合蛋白,GST-Klotho融合蛋白表达量占菌体总蛋白的15 %左右;另外通过ELISA法测得抗血清抗体效价约为1∶ 10 000,Western印迹分析验证了抗体特异性.结论 GST-Klotho融合蛋白的表达和Klotho多克隆抗体的制备为进一步研究Klotho蛋白在小鼠体内的表达模式以及相关抗衰老药物的研制奠定了基础.
目的 剋隆小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因特異片段,製備小鼠Klotho多剋隆抗體.方法 以小鼠基因組為模闆進行PCR,剋隆瞭小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因外顯子Ⅳ部分序列,經BamHⅠ和NheⅠ雙酶切後定嚮剋隆到質粒pET-GST中,構建原覈錶達質粒pET-GST-Klotho,轉化大腸埃希菌BL21(DE3),用IPTG誘導錶達.以重組GST-Klotho融閤蛋白免疫傢兔, 製備Klotho多剋隆抗體.結果 錶達產物經SDS-PAGE檢測錶明,在大腸埃希菌中成功錶達瞭GST-Klotho融閤蛋白,GST-Klotho融閤蛋白錶達量佔菌體總蛋白的15 %左右;另外通過ELISA法測得抗血清抗體效價約為1∶ 10 000,Western印跡分析驗證瞭抗體特異性.結論 GST-Klotho融閤蛋白的錶達和Klotho多剋隆抗體的製備為進一步研究Klotho蛋白在小鼠體內的錶達模式以及相關抗衰老藥物的研製奠定瞭基礎.
목적 극륭소서막형항쇠로단백Klotho기인특이편단,제비소서Klotho다극륭항체.방법 이소서기인조위모판진행PCR,극륭료소서막형항쇠로단백Klotho기인외현자Ⅳ부분서렬,경BamHⅠ화NheⅠ쌍매절후정향극륭도질립pET-GST중,구건원핵표체질립pET-GST-Klotho,전화대장애희균BL21(DE3),용IPTG유도표체.이중조GST-Klotho융합단백면역가토, 제비Klotho다극륭항체.결과 표체산물경SDS-PAGE검측표명,재대장애희균중성공표체료GST-Klotho융합단백,GST-Klotho융합단백표체량점균체총단백적15 %좌우;령외통과ELISA법측득항혈청항체효개약위1∶ 10 000,Western인적분석험증료항체특이성.결론 GST-Klotho융합단백적표체화Klotho다극륭항체적제비위진일보연구Klotho단백재소서체내적표체모식이급상관항쇠로약물적연제전정료기출.
