生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
2期
19-21
,共3页
洪键%石云%吴生才%王加连%刘忠权
洪鍵%石雲%吳生纔%王加連%劉忠權
홍건%석운%오생재%왕가련%류충권
LDHC%原核表达%生物学活性
LDHC%原覈錶達%生物學活性
LDHC%원핵표체%생물학활성
目的:克隆水牛睾丸特异Ldhc基因全长在大肠杆菌中原核表达,研究其生物学活性.方法:以水牛睾丸组织为材料提取总RNA,RT-PCR扩增Ldhc cDNA,PCR获得水牛全长Ldhc基因;连接pET-32b构建表达质粒pET-32b-Ldhc;转化BL21(DE3)大肠杆菌,IPTG诱导表达并利用SDS-PAGE分析.体外Ni离子柱纯化目的蛋白,Western印迹鉴定其抗体结合活性,同工酶谱鉴定其生物学活性.结果:成功制备了表达质粒pET-32b-Ldhc;IPTG诱导得到56KDa目的蛋白;Ni柱纯化获得纯度90%以上的蛋白;Western印迹显示目的蛋白具有特异的抗体结合活性;同工酶活性染色证明其具有乳酸脱氢酶活性.结论:试验成功制备了水牛睾丸LDH-CA蛋白,并初步验证了其生物学活性,为我们进一步探讨LDH-G4的功能及免疫节育疫苗的制备等奠定了基础.
目的:剋隆水牛睪汍特異Ldhc基因全長在大腸桿菌中原覈錶達,研究其生物學活性.方法:以水牛睪汍組織為材料提取總RNA,RT-PCR擴增Ldhc cDNA,PCR穫得水牛全長Ldhc基因;連接pET-32b構建錶達質粒pET-32b-Ldhc;轉化BL21(DE3)大腸桿菌,IPTG誘導錶達併利用SDS-PAGE分析.體外Ni離子柱純化目的蛋白,Western印跡鑒定其抗體結閤活性,同工酶譜鑒定其生物學活性.結果:成功製備瞭錶達質粒pET-32b-Ldhc;IPTG誘導得到56KDa目的蛋白;Ni柱純化穫得純度90%以上的蛋白;Western印跡顯示目的蛋白具有特異的抗體結閤活性;同工酶活性染色證明其具有乳痠脫氫酶活性.結論:試驗成功製備瞭水牛睪汍LDH-CA蛋白,併初步驗證瞭其生物學活性,為我們進一步探討LDH-G4的功能及免疫節育疫苗的製備等奠定瞭基礎.
목적:극륭수우고환특이Ldhc기인전장재대장간균중원핵표체,연구기생물학활성.방법:이수우고환조직위재료제취총RNA,RT-PCR확증Ldhc cDNA,PCR획득수우전장Ldhc기인;련접pET-32b구건표체질립pET-32b-Ldhc;전화BL21(DE3)대장간균,IPTG유도표체병이용SDS-PAGE분석.체외Ni리자주순화목적단백,Western인적감정기항체결합활성,동공매보감정기생물학활성.결과:성공제비료표체질립pET-32b-Ldhc;IPTG유도득도56KDa목적단백;Ni주순화획득순도90%이상적단백;Western인적현시목적단백구유특이적항체결합활성;동공매활성염색증명기구유유산탈경매활성.결론:시험성공제비료수우고환LDH-CA단백,병초보험증료기생물학활성,위아문진일보탐토LDH-G4적공능급면역절육역묘적제비등전정료기출.
