CAJ | 학술논문

从口蹄疫病毒Asia I/Jiangsu毒株的细胞毒中提取总RNA,通过RT-PCR方法分别获得FMDV的P12A及3C基因;同时以pMD18-T-α-IFN质粒为模板,PCR扩增得到α-IFN基因.将α-IFN基因及FMDV P12A及3C基因连接至双启动子表达载体pBudCE4.1上,构建成双效表达质粒pBudCE4.1-α-IFN-P12A3C,经电泳、PCR、双酶切和DNA测序鉴定表明双效质粒载体构建成功.用此重组质粒转染BHK-21细胞后并对其表达情况进行检测,表明该双表达质粒在BHK-21细胞中能够成功表达.以此重组质粒免疫乳鼠后12 h,按100 TCID50/O.1 mL的量进行攻毒,结果发现该质粒能够抑制病毒的增殖,对乳鼠有一定的保护作用.结果表明成功构建了牛α-IFN及FMDV P12A3C组合基因双表达载体,为进一步研究口蹄疫基因疫苗提供前期基础.
종구제역병독Asia I/Jiangsu독주적세포독중제취총RNA,통과RT-PCR방법분별획득FMDV적P12A급3C기인;동시이pMD18-T-α-IFN질립위모판,PCR확증득도α-IFN기인.장α-IFN기인급FMDV P12A급3C기인련접지쌍계동자표체재체pBudCE4.1상,구건성쌍효표체질립pBudCE4.1-α-IFN-P12A3C,경전영、PCR、쌍매절화DNA측서감정표명쌍효질립재체구건성공.용차중조질립전염BHK-21세포후병대기표체정황진행검측,표명해쌍표체질립재BHK-21세포중능구성공표체.이차중조질립면역유서후12 h,안100 TCID50/O.1 mL적량진행공독,결과발현해질립능구억제병독적증식,대유서유일정적보호작용.결과표명성공구건료우α-IFN급FMDV P12A3C조합기인쌍표체재체,위진일보연구구제역기인역묘제공전기기출.