南京农业大学学报
南京農業大學學報
남경농업대학학보
JOURNAL OF NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY
2006年
2期
50-56
,共7页
水稻条斑病菌%水稻白叶枯病菌%基因敲除%LPS合成基因%无毒基因
水稻條斑病菌%水稻白葉枯病菌%基因敲除%LPS閤成基因%無毒基因
수도조반병균%수도백협고병균%기인고제%LPS합성기인%무독기인
wxocA、wxocB、wxocD、wxocE和wzt是水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xooc)的脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)合成基因,avrXa3是水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)的一个无毒基因.利用pBCSK(-)和pKNG101两个质粒的复制起点不被水稻黄单胞菌识别的特点,把wxocA、wxocD、wxocE和wzt的中心区域克隆在pBCSK(-)上,获得突变转化单元pBCSK∷ΔwxocA、pBCSK∷ΔwxocD、pBCSK∷ΔwxocE和pBCSK∷Δwzt.把wxocB和avrXa3基因的旁侧序列和一个氯霉素抗性基因cm构建在pKNG101上,获得突变转化单元pKNG101∷ΔwxocB和pKNG101∷Δavr.以电转化方式把这些LPS合成基因突变转化单元DNA转入Xooc菌株RS105,把无毒基因突变转化单元转入Xoo菌株PXO99,通过同源重组分别获得了RS105中5个lps相应基因突变体MwxocA、MwxocB、MwxocD、MwxocE、Mwzt和一个无毒基因的突变体PXO99Δavr.SDS-PAGE分析发现,lps突变体的O抗原或核心寡糖的合成被破坏.致病性分析结果显示,基因wxocB、wxocE和wzt与致病性有关,前两基因的突变导致细菌完全失去毒性,而后一基因的突变导致细菌部分丧失毒性.与PX099相比无毒基因突变体PXO99Δavr改变了原有的毒性表型,在IRBB50(Xa4/xa5)和Asominori(Xal7)上由较感转变为较抗表型.因此,本试验证明,以pBCSK(-)和pKNG101为载体敲除水稻条斑病菌和白叶枯病菌致病相关基因是可行的.
wxocA、wxocB、wxocD、wxocE和wzt是水稻條斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xooc)的脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)閤成基因,avrXa3是水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)的一箇無毒基因.利用pBCSK(-)和pKNG101兩箇質粒的複製起點不被水稻黃單胞菌識彆的特點,把wxocA、wxocD、wxocE和wzt的中心區域剋隆在pBCSK(-)上,穫得突變轉化單元pBCSK∷ΔwxocA、pBCSK∷ΔwxocD、pBCSK∷ΔwxocE和pBCSK∷Δwzt.把wxocB和avrXa3基因的徬側序列和一箇氯黴素抗性基因cm構建在pKNG101上,穫得突變轉化單元pKNG101∷ΔwxocB和pKNG101∷Δavr.以電轉化方式把這些LPS閤成基因突變轉化單元DNA轉入Xooc菌株RS105,把無毒基因突變轉化單元轉入Xoo菌株PXO99,通過同源重組分彆穫得瞭RS105中5箇lps相應基因突變體MwxocA、MwxocB、MwxocD、MwxocE、Mwzt和一箇無毒基因的突變體PXO99Δavr.SDS-PAGE分析髮現,lps突變體的O抗原或覈心寡糖的閤成被破壞.緻病性分析結果顯示,基因wxocB、wxocE和wzt與緻病性有關,前兩基因的突變導緻細菌完全失去毒性,而後一基因的突變導緻細菌部分喪失毒性.與PX099相比無毒基因突變體PXO99Δavr改變瞭原有的毒性錶型,在IRBB50(Xa4/xa5)和Asominori(Xal7)上由較感轉變為較抗錶型.因此,本試驗證明,以pBCSK(-)和pKNG101為載體敲除水稻條斑病菌和白葉枯病菌緻病相關基因是可行的.
wxocA、wxocB、wxocD、wxocE화wzt시수도조반병균(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xooc)적지다당(1ipopolysaccharide,LPS)합성기인,avrXa3시수도백협고병균(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)적일개무독기인.이용pBCSK(-)화pKNG101량개질립적복제기점불피수도황단포균식별적특점,파wxocA、wxocD、wxocE화wzt적중심구역극륭재pBCSK(-)상,획득돌변전화단원pBCSK∷ΔwxocA、pBCSK∷ΔwxocD、pBCSK∷ΔwxocE화pBCSK∷Δwzt.파wxocB화avrXa3기인적방측서렬화일개록매소항성기인cm구건재pKNG101상,획득돌변전화단원pKNG101∷ΔwxocB화pKNG101∷Δavr.이전전화방식파저사LPS합성기인돌변전화단원DNA전입Xooc균주RS105,파무독기인돌변전화단원전입Xoo균주PXO99,통과동원중조분별획득료RS105중5개lps상응기인돌변체MwxocA、MwxocB、MwxocD、MwxocE、Mwzt화일개무독기인적돌변체PXO99Δavr.SDS-PAGE분석발현,lps돌변체적O항원혹핵심과당적합성피파배.치병성분석결과현시,기인wxocB、wxocE화wzt여치병성유관,전량기인적돌변도치세균완전실거독성,이후일기인적돌변도치세균부분상실독성.여PX099상비무독기인돌변체PXO99Δavr개변료원유적독성표형,재IRBB50(Xa4/xa5)화Asominori(Xal7)상유교감전변위교항표형.인차,본시험증명,이pBCSK(-)화pKNG101위재체고제수도조반병균화백협고병균치병상관기인시가행적.
