CAJ | 학술논문

目的:应用次级淋巴组织趋化因子(SLC)成熟肽基因/重组腺相关病毒(rAAV-SLC)转染树突状细胞(DC),探讨一种基因修饰DC的新方法及其抗肿瘤的生物学活性.方法:体外构建rAAV-SLC,按MOI为10、50、100与腺病毒(Ad2)协同转染小鼠骨髓来源成熟和未成熟DC,GFP作为成功转染的示踪蛋白.RT-PCR在mRNA水平、ELISA在蛋白水平检测SLC表达,Transwell检测转染DC的培养上清对T细胞的趋化作用.瘤苗的在体效应通过C57BL/6J小鼠肿瘤模型验证.皮下接种Hepal-6肿瘤细胞后成瘤小鼠分成3组:①生理盐水对照组,瘤内或足垫注射NS;②单纯DC对照组,瘤内或足垫注射未修饰DC;③SLC基因修饰DC组,瘤内或足垫注射SLC基因修饰的DC.每隔7天注射1次,观察各组小鼠肿瘤的生长情况.4周后分离瘤体,用荧光免疫组化检测瘤体内CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润情况.结果:rAAV-SLC在MOI为100时能成功转染DC,未成熟DC的转染效率显著高于成熟DC,并产生对T细胞有明显趋化生物学活性的SLC.动物实验表明,瘤内注射SLC修饰后DC,肿瘤大小与对照组有明显差异,免疫组化显示瘤体内有较多的CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润.足垫注射SLC修饰的DC与对照组相比,抗肿瘤作用无显著差异.结论:rAAV-SLC在Ad2的辅助下能有效转染未成熟DC并能表达具有趋化生物学活性的SLC.SLC基因修饰的树突状细胞瘤内注射以其对CD4+T细胞、CD8+T细胞的吸引作用而发挥了明显的抗肿瘤作用,同时也进一步证实用树突状细胞进行肿瘤生物免疫治疗时,不同免疫方式对疗效有明显影响.
목적:응용차급림파조직추화인자(SLC)성숙태기인/중조선상관병독(rAAV-SLC)전염수돌상세포(DC),탐토일충기인수식DC적신방법급기항종류적생물학활성.방법:체외구건rAAV-SLC,안MOI위10、50、100여선병독(Ad2)협동전염소서골수래원성숙화미성숙DC,GFP작위성공전염적시종단백.RT-PCR재mRNA수평、ELISA재단백수평검측SLC표체,Transwell검측전염DC적배양상청대T세포적추화작용.류묘적재체효응통과C57BL/6J소서종류모형험증.피하접충Hepal-6종류세포후성류소서분성3조:①생리염수대조조,류내혹족점주사NS;②단순DC대조조,류내혹족점주사미수식DC;③SLC기인수식DC조,류내혹족점주사SLC기인수식적DC.매격7천주사1차,관찰각조소서종류적생장정황.4주후분리류체,용형광면역조화검측류체내CD4+T세포、CD8+T세포침윤정황.결과:rAAV-SLC재MOI위100시능성공전염DC,미성숙DC적전염효솔현저고우성숙DC,병산생대T세포유명현추화생물학활성적SLC.동물실험표명,류내주사SLC수식후DC,종류대소여대조조유명현차이,면역조화현시류체내유교다적CD4+T세포、CD8+T세포침윤.족점주사SLC수식적DC여대조조상비,항종류작용무현저차이.결론:rAAV-SLC재Ad2적보조하능유효전염미성숙DC병능표체구유추화생물학활성적SLC.SLC기인수식적수돌상세포류내주사이기대CD4+T세포、CD8+T세포적흡인작용이발휘료명현적항종류작용,동시야진일보증실용수돌상세포진행종류생물면역치료시,불동면역방식대료효유명현영향.