医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2009年
1期
30-34
,共5页
徐琴%郑恩霞%汪新颖%朱友明%朱国萍
徐琴%鄭恩霞%汪新穎%硃友明%硃國萍
서금%정은하%왕신영%주우명%주국평
可溶性吡啶核苷酸转氢酶%异柠檬酸脱氢酶%双启动子%双基因
可溶性吡啶覈苷痠轉氫酶%異檸檬痠脫氫酶%雙啟動子%雙基因
가용성필정핵감산전경매%이저몽산탈경매%쌍계동자%쌍기인
目的 构建携带E.coli可溶性吡啶核苷酸转氢酶(UdhA)基因的双启动子双基因表达载体,鉴定此载体系统对表达效率不高的链球菌异柠檬酸脱氢酶(SmIDH)的促进表达.方法 PCR法扩增SmIDH基因,插入pBluescriptⅡ SK(+)得表达载体pSX.从E.coli基因组扩增UdhA基因,插入pBluescriptⅡ SK(+),构建表达载体pUX.再用以pUX为模板PCR扩增lac启动子和UdhA基因片段,插入pSX 中,获得双启动子双基因表达载体 pUS.IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定SmIDH的表达.结果 酶切证实UdhA和SmIDH双基因正确克隆到pBluescriptⅡ SK(+) 中,序列测定显示双基因与 GenBank报道一致及两个lac启动子方向相同,并且初步的表达实验证明UdhA促进了SmIDH的表达.结论 UdhA的表达促进了SmIDH基因的表达,为该表达策略的通用性研究奠定了基础.
目的 構建攜帶E.coli可溶性吡啶覈苷痠轉氫酶(UdhA)基因的雙啟動子雙基因錶達載體,鑒定此載體繫統對錶達效率不高的鏈毬菌異檸檬痠脫氫酶(SmIDH)的促進錶達.方法 PCR法擴增SmIDH基因,插入pBluescriptⅡ SK(+)得錶達載體pSX.從E.coli基因組擴增UdhA基因,插入pBluescriptⅡ SK(+),構建錶達載體pUX.再用以pUX為模闆PCR擴增lac啟動子和UdhA基因片段,插入pSX 中,穫得雙啟動子雙基因錶達載體 pUS.IPTG誘導錶達,SDS-PAGE鑒定SmIDH的錶達.結果 酶切證實UdhA和SmIDH雙基因正確剋隆到pBluescriptⅡ SK(+) 中,序列測定顯示雙基因與 GenBank報道一緻及兩箇lac啟動子方嚮相同,併且初步的錶達實驗證明UdhA促進瞭SmIDH的錶達.結論 UdhA的錶達促進瞭SmIDH基因的錶達,為該錶達策略的通用性研究奠定瞭基礎.
목적 구건휴대E.coli가용성필정핵감산전경매(UdhA)기인적쌍계동자쌍기인표체재체,감정차재체계통대표체효솔불고적련구균이저몽산탈경매(SmIDH)적촉진표체.방법 PCR법확증SmIDH기인,삽입pBluescriptⅡ SK(+)득표체재체pSX.종E.coli기인조확증UdhA기인,삽입pBluescriptⅡ SK(+),구건표체재체pUX.재용이pUX위모판PCR확증lac계동자화UdhA기인편단,삽입pSX 중,획득쌍계동자쌍기인표체재체 pUS.IPTG유도표체,SDS-PAGE감정SmIDH적표체.결과 매절증실UdhA화SmIDH쌍기인정학극륭도pBluescriptⅡ SK(+) 중,서렬측정현시쌍기인여 GenBank보도일치급량개lac계동자방향상동,병차초보적표체실험증명UdhA촉진료SmIDH적표체.결론 UdhA적표체촉진료SmIDH기인적표체,위해표체책략적통용성연구전정료기출.
