中国急救医学
中國急救醫學
중국급구의학
CHINESE JOURNAL OF CRITICAL CARE MEDICINE
2010年
7期
614-617,封3
,共5页
屈纪富%江德鹏%史春梦%程天民
屈紀富%江德鵬%史春夢%程天民
굴기부%강덕붕%사춘몽%정천민
白细胞蛋白酶抑制因子%真核表达载体%真皮多能干细胞%创伤
白細胞蛋白酶抑製因子%真覈錶達載體%真皮多能榦細胞%創傷
백세포단백매억제인자%진핵표체재체%진피다능간세포%창상
目的 克隆大鼠白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)基因,构建其真核表达载体,并转染大鼠真皮多能干细胞,以探讨SLPI在创伤及炎症性疾病中的意义.方法 PCR扩增大鼠皮肤SLPI基因 cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N2重组,将SLPI基因 cDNA片段连接到pEGFP-N2载体的多克隆位点,形成重组载体pEGFP/SLPI,转化大肠杆菌DH5α菌株,构建成SLPI基因真核表达载体质粒.扩增DH5α后抽提质粒DNA,Hind Ⅲ和BamHⅠ酶切,电泳,DNA测序鉴定.鉴定正确的质粒DNA用脂质体包裹后转染大鼠真皮多能干细胞,通过荧光显微镜和RT-PCR方法 来检测基因转染及表达.结果从大鼠皮肤cDNA扩增出392 bp的DNA片段并成功重组到pEGFP-N2载体中.经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为SLPI基因,插入方向正确.重组质粒经脂质体转染真皮多能干细胞,24 h后观察到绿色荧光蛋白报告基因和目的 基因SLPI表达.结论 大鼠SLPI基因的克隆和真核表达载体构建获得成功,为进一步研究其功能奠定了基础.
目的 剋隆大鼠白細胞蛋白酶抑製因子(SLPI)基因,構建其真覈錶達載體,併轉染大鼠真皮多能榦細胞,以探討SLPI在創傷及炎癥性疾病中的意義.方法 PCR擴增大鼠皮膚SLPI基因 cDNA,酶切後和攜帶綠色熒光蛋白報告基因的真覈錶達載體pEGFP-N2重組,將SLPI基因 cDNA片段連接到pEGFP-N2載體的多剋隆位點,形成重組載體pEGFP/SLPI,轉化大腸桿菌DH5α菌株,構建成SLPI基因真覈錶達載體質粒.擴增DH5α後抽提質粒DNA,Hind Ⅲ和BamHⅠ酶切,電泳,DNA測序鑒定.鑒定正確的質粒DNA用脂質體包裹後轉染大鼠真皮多能榦細胞,通過熒光顯微鏡和RT-PCR方法 來檢測基因轉染及錶達.結果從大鼠皮膚cDNA擴增齣392 bp的DNA片段併成功重組到pEGFP-N2載體中.經酶切和DNA測序驗證,插入載體的DNA片段為SLPI基因,插入方嚮正確.重組質粒經脂質體轉染真皮多能榦細胞,24 h後觀察到綠色熒光蛋白報告基因和目的 基因SLPI錶達.結論 大鼠SLPI基因的剋隆和真覈錶達載體構建穫得成功,為進一步研究其功能奠定瞭基礎.
목적 극륭대서백세포단백매억제인자(SLPI)기인,구건기진핵표체재체,병전염대서진피다능간세포,이탐토SLPI재창상급염증성질병중적의의.방법 PCR확증대서피부SLPI기인 cDNA,매절후화휴대록색형광단백보고기인적진핵표체재체pEGFP-N2중조,장SLPI기인 cDNA편단련접도pEGFP-N2재체적다극륭위점,형성중조재체pEGFP/SLPI,전화대장간균DH5α균주,구건성SLPI기인진핵표체재체질립.확증DH5α후추제질립DNA,Hind Ⅲ화BamHⅠ매절,전영,DNA측서감정.감정정학적질립DNA용지질체포과후전염대서진피다능간세포,통과형광현미경화RT-PCR방법 래검측기인전염급표체.결과종대서피부cDNA확증출392 bp적DNA편단병성공중조도pEGFP-N2재체중.경매절화DNA측서험증,삽입재체적DNA편단위SLPI기인,삽입방향정학.중조질립경지질체전염진피다능간세포,24 h후관찰도록색형광단백보고기인화목적 기인SLPI표체.결론 대서SLPI기인적극륭화진핵표체재체구건획득성공,위진일보연구기공능전정료기출.
