CAJ | 학술논문

目的:构建含有人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3,研究CXCR3与其配体Mig、IP-10及I-TAC相互作用引起的L929-CXCR3的迁移效应.方法:TRIzol一步法从经PHA和IL-2活化的人PBMC中抽提总RNA,RT-PCR 扩增人CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集培养上清感染L929细胞,500 μg/ml zeocin加压筛选获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3.采用流式细胞术和RT-PCR分别从蛋白及基因水平对CXCR3的表达进行鉴定.Transwell分析L929-CXCR3细胞在Mig、IP-10及I-TAC作用下的迁移率.结果:构建了含人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了人CXCR3基因转染细胞株L929-CXCR3,其膜表面CXCR3分子的阳性表达率为98.4%;趋化L929-CXCR3发生迁移的最小配体浓度分别为Mig 10 ng/ml、IP-10 5 ng/ml及I-TAC 1 ng/ml,相应迁移率分别为2.46%、2.34%及2.24%.结论:L929-CXCR3细胞株的建立为研究CXCR3信号转导与生物学功能及制备相应的单克隆抗体奠定了基础.
목적:구건함유인CXCR3기인적중조역전록병독재체,획득은정표체인CXCR3분자적기인전염세포주L929-CXCR3,연구CXCR3여기배체Mig、IP-10급I-TAC상호작용인기적L929-CXCR3적천이효응.방법:TRIzol일보법종경PHA화IL-2활화적인PBMC중추제총RNA,RT-PCR 확증인CXCR3전장기인,장입역전록병독재체pEGZ-term,여량보조병독재체지질체법공전염포장세포293T,수집배양상청감염L929세포,500 μg/ml zeocin가압사선획득은정표체인CXCR3분자적기인전염세포주L929-CXCR3.채용류식세포술화RT-PCR분별종단백급기인수평대CXCR3적표체진행감정.Transwell분석L929-CXCR3세포재Mig、IP-10급I-TAC작용하적천이솔.결과:구건료함인CXCR3기인적중조역전록병독재체,건립료인CXCR3기인전염세포주L929-CXCR3,기막표면CXCR3분자적양성표체솔위98.4%;추화L929-CXCR3발생천이적최소배체농도분별위Mig 10 ng/ml、IP-10 5 ng/ml급I-TAC 1 ng/ml,상응천이솔분별위2.46%、2.34%급2.24%.결론:L929-CXCR3세포주적건립위연구CXCR3신호전도여생물학공능급제비상응적단극륭항체전정료기출.