CAJ | 학술논문

为了建立大肠杆菌O157∶H7菌体蛋白的双向电泳技术,获得背景清晰,蛋白点分辨率高,重复性好的双向电泳图谱.对双向电泳技术中的样品制备方法、上样量、染色等关键步骤进行了优化.最终选用冰浴超声(9 s/间隔9 s,200 w)3min,再置4℃24 h后离心提取蛋白样品,以上样量为0.5 mg菌体蛋白在pH值4-7的24 cm IPG胶条上进行电泳,最后用考马斯亮蓝G-250染色,获得了较好的双向电泳图谱,得到了850士20个蛋白质点,蛋白主要集中在pH值4.06-7.53之间,匹配率为95.3％.随机选取10个蛋白质点进行质谱鉴定,检出率100％,10个蛋白质除了一个蛋白质为假定蛋白以外,其他蛋白质分属于乙酰辅酶A合成、能量代谢、氨基酸代谢等代谢途径.建立的大肠杆菌O157∶H7菌体蛋白双向电泳方法,为开展大肠杆菌O157∶H7强弱毒力菌株的差异蛋白质组学研究奠定了基础.
위료건립대장간균O157∶H7균체단백적쌍향전영기술,획득배경청석,단백점분변솔고,중복성호적쌍향전영도보.대쌍향전영기술중적양품제비방법、상양량、염색등관건보취진행료우화.최종선용빙욕초성(9 s/간격9 s,200 w)3min,재치4℃24 h후리심제취단백양품,이상양량위0.5 mg균체단백재pH치4-7적24 cm IPG효조상진행전영,최후용고마사량람G-250염색,획득료교호적쌍향전영도보,득도료850사20개단백질점,단백주요집중재pH치4.06-7.53지간,필배솔위95.3％.수궤선취10개단백질점진행질보감정,검출솔100％,10개단백질제료일개단백질위가정단백이외,기타단백질분속우을선보매A합성、능량대사、안기산대사등대사도경.건립적대장간균O157∶H7균체단백쌍향전영방법,위개전대장간균O157∶H7강약독력균주적차이단백질조학연구전정료기출.