植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2012年
2期
139-145
,共7页
杨丽荣%孙虎%雷振生%赵献林%全鑫%薛保国
楊麗榮%孫虎%雷振生%趙獻林%全鑫%薛保國
양려영%손호%뢰진생%조헌림%전흠%설보국
绿色木霉%几丁质酶基因%基因克隆%原核表达
綠色木黴%幾丁質酶基因%基因剋隆%原覈錶達
록색목매%궤정질매기인%기인극륭%원핵표체
利用RT-PCR方法从绿木霉ZBS-6中扩增了几丁质酶基因Tvchi,序列分析表明Tvchi开放阅读框为1293 bp,编码430个氨基酸残基,Blast分析表明,与多种木霉18家族内切几丁质酶具有较高的同源性.将该基因克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21( DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western印迹分析表明成功的获得了47kD的融合蛋白.该融合蛋白经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白Tvchi.Tvchi最适酶活温度为37℃,最适酶活pH值为6.8.表达产物对小麦全蚀病、赤霉病、纹枯病病原菌显示出较好的抑菌活性.本研究结果将为进一步研究木霉几丁质酶的应用提供了基础.
利用RT-PCR方法從綠木黴ZBS-6中擴增瞭幾丁質酶基因Tvchi,序列分析錶明Tvchi開放閱讀框為1293 bp,編碼430箇氨基痠殘基,Blast分析錶明,與多種木黴18傢族內切幾丁質酶具有較高的同源性.將該基因剋隆到原覈錶達載體pET-28a上,轉化大腸桿菌BL21( DE3),經IPTG誘導,SDS-PAGE和Western印跡分析錶明成功的穫得瞭47kD的融閤蛋白.該融閤蛋白經Ni-NTA柱親和純化,穫得瞭純度較高的融閤蛋白Tvchi.Tvchi最適酶活溫度為37℃,最適酶活pH值為6.8.錶達產物對小麥全蝕病、赤黴病、紋枯病病原菌顯示齣較好的抑菌活性.本研究結果將為進一步研究木黴幾丁質酶的應用提供瞭基礎.
이용RT-PCR방법종록목매ZBS-6중확증료궤정질매기인Tvchi,서렬분석표명Tvchi개방열독광위1293 bp,편마430개안기산잔기,Blast분석표명,여다충목매18가족내절궤정질매구유교고적동원성.장해기인극륭도원핵표체재체pET-28a상,전화대장간균BL21( DE3),경IPTG유도,SDS-PAGE화Western인적분석표명성공적획득료47kD적융합단백.해융합단백경Ni-NTA주친화순화,획득료순도교고적융합단백Tvchi.Tvchi최괄매활온도위37℃,최괄매활pH치위6.8.표체산물대소맥전식병、적매병、문고병병원균현시출교호적억균활성.본연구결과장위진일보연구목매궤정질매적응용제공료기출.
