山东医科大学学报
山東醫科大學學報
산동의과대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SHANDONG
2002年
1期
17-18，22
,共3页
万兵%张利宁%马春红%宋静%曹英林%李长菲%孙汶生
萬兵%張利寧%馬春紅%宋靜%曹英林%李長菲%孫汶生
만병%장리저%마춘홍%송정%조영림%리장비%손문생
受体,T淋巴细胞%基因表达%载体蛋白质类
受體,T淋巴細胞%基因錶達%載體蛋白質類
수체,T림파세포%기인표체%재체단백질류
目的:构建人4-1BB胞膜外区-hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体.方法:PCR扩增人4-1BB胞膜外区和hIgG1Fc基因片段,用HindⅢ、Pst I酶切4-1BB胞膜外区,PstI、EcoR I酶切hIgG1Fc,HindⅢ、EcoRI酶切pCDNA3,纯化后的酶切产物经T4DNA连接酶连接,转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选阳性克隆,PCR及测序鉴定.结果:连接反应产物转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选出多个阳性克隆;分别以针对4-1BB胞膜外区和hIgG1Fc的引物进行PCR扩增,电泳后观察到一558bp、708bp的特异性条带,与4-1BB胞膜外区和hIgG1Fc相符,提示构建成功.进一步测序分析证明克隆在pCDNA3质粒中的4-1BB和hIgG1Fc序列和读码框架正确,无基因突变.结论:成功构建人4-1BB胞膜外区-hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体,为表达4-1BB融合蛋白奠定基础.
目的:構建人4-1BB胞膜外區-hIgG1Fc融閤蛋白真覈錶達載體.方法:PCR擴增人4-1BB胞膜外區和hIgG1Fc基因片段,用HindⅢ、Pst I酶切4-1BB胞膜外區,PstI、EcoR I酶切hIgG1Fc,HindⅢ、EcoRI酶切pCDNA3,純化後的酶切產物經T4DNA連接酶連接,轉化大腸桿菌DH5α,氨芐青黴素篩選暘性剋隆,PCR及測序鑒定.結果:連接反應產物轉化大腸桿菌DH5α,氨芐青黴素篩選齣多箇暘性剋隆;分彆以針對4-1BB胞膜外區和hIgG1Fc的引物進行PCR擴增,電泳後觀察到一558bp、708bp的特異性條帶,與4-1BB胞膜外區和hIgG1Fc相符,提示構建成功.進一步測序分析證明剋隆在pCDNA3質粒中的4-1BB和hIgG1Fc序列和讀碼框架正確,無基因突變.結論:成功構建人4-1BB胞膜外區-hIgG1Fc融閤蛋白真覈錶達載體,為錶達4-1BB融閤蛋白奠定基礎.
목적:구건인4-1BB포막외구-hIgG1Fc융합단백진핵표체재체.방법:PCR확증인4-1BB포막외구화hIgG1Fc기인편단,용HindⅢ、Pst I매절4-1BB포막외구,PstI、EcoR I매절hIgG1Fc,HindⅢ、EcoRI매절pCDNA3,순화후적매절산물경T4DNA련접매련접,전화대장간균DH5α,안변청매소사선양성극륭,PCR급측서감정.결과:련접반응산물전화대장간균DH5α,안변청매소사선출다개양성극륭;분별이침대4-1BB포막외구화hIgG1Fc적인물진행PCR확증,전영후관찰도일558bp、708bp적특이성조대,여4-1BB포막외구화hIgG1Fc상부,제시구건성공.진일보측서분석증명극륭재pCDNA3질립중적4-1BB화hIgG1Fc서렬화독마광가정학,무기인돌변.결론:성공구건인4-1BB포막외구-hIgG1Fc융합단백진핵표체재체,위표체4-1BB융합단백전정기출.
