细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
12期
1143-1146
,共4页
汤小江%平宝华%潘承恩%杨广笑%王全颖
湯小江%平寶華%潘承恩%楊廣笑%王全穎
탕소강%평보화%반승은%양엄소%왕전영
Survivin%Ant%NT4%融合基因%重组腺相关病毒
Survivin%Ant%NT4%融閤基因%重組腺相關病毒
Survivin%Ant%NT4%융합기인%중조선상관병독
目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体.方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因,连接腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV,采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染HEK-293细胞获取重组腺相关病毒,Dot-blot法测定重组病毒滴度,MTT比色法观察重组腺相关病毒对A549细胞存活率的影响.结果:合成Ant-Shepherdin[79-87]基因,连接PBV220-NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321 bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因;得到高滴度的(3.4×1013pfu/L)重组腺相关病毒表达载体;带有融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒对A549细胞具有强烈的诱导凋亡作用.结论:成功构建了NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组腺相关病毒表达载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础.
目的:設計構建融閤基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重組腺相關病毒錶達載體.方法:應用非對稱引物/模闆法,PCR技術製備Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通過連接pGEM-T-Easy載體及PBV220-NT4質粒,轉化感受態細胞,穫得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融閤基因,連接腺相關病毒穿梭質粒pSSHG-CMV,採用燐痠鈣沉澱法三質粒共轉染HEK-293細胞穫取重組腺相關病毒,Dot-blot法測定重組病毒滴度,MTT比色法觀察重組腺相關病毒對A549細胞存活率的影響.結果:閤成Ant-Shepherdin[79-87]基因,連接PBV220-NT4,經剋隆、酶切,瓊脂糖凝膠電泳證實穫得321 bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因;得到高滴度的(3.4×1013pfu/L)重組腺相關病毒錶達載體;帶有融閤基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重組腺相關病毒對A549細胞具有彊烈的誘導凋亡作用.結論:成功構建瞭NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融閤基因的重組腺相關病毒錶達載體,為進一步研究針對Survivin的靶嚮抗腫瘤作用奠定瞭基礎.
목적:설계구건융합기인NT4-Ant-Shepherdin[79-87]적중조선상관병독표체재체.방법:응용비대칭인물/모판법,PCR기술제비Ant-Shepherdin[79-87]cDNA편단,통과련접pGEM-T-Easy재체급PBV220-NT4질립,전화감수태세포,획득NT4-Ant-Shepherdin[79-87]융합기인,련접선상관병독천사질립pSSHG-CMV,채용린산개침정법삼질립공전염HEK-293세포획취중조선상관병독,Dot-blot법측정중조병독적도,MTT비색법관찰중조선상관병독대A549세포존활솔적영향.결과:합성Ant-Shepherdin[79-87]기인,련접PBV220-NT4,경극륭、매절,경지당응효전영증실획득321 bp적NT4-Ant-Shepherdin[79-87]목적기인;득도고적도적(3.4×1013pfu/L)중조선상관병독표체재체;대유융합기인NT4-Ant-Shepherdin[79-87]적중조선상관병독대A549세포구유강렬적유도조망작용.결론:성공구건료NT4-Ant-Shepherdin[79-87]융합기인적중조선상관병독표체재체,위진일보연구침대Survivin적파향항종류작용전정료기출.
